α－萘胺法植物根系活力測定實驗

吸附在根表面的α－萘胺會被植物根所氧化，生成紅色的2－羥基－1－萘胺沉淀于具有氧化力的根表，使這部分根染成紅色。

根對α－萘胺的氧化力與其呼吸強度，主要是與呼吸酶過氧化物酶活性有著密切關系，據認為α－萘胺氧化過程是在過氧化物酶的催化下進行的，該酶的活力愈強，對α－萘胺的氧化力就愈強，染色也就愈深。所以，可以根據染色深淺定性地判斷根的活力。

水培水稻

α－萘胺母液

分光光度計電子分析天平振蕩器刻度試管試管架移液管移液管架吸水紙洗耳球黑紙三角瓶量筒

一、材料儀器設備及試劑

1. 材料：水培水稻等植物根系

2. 儀器設備：分光光度計，電子分析天平，振蕩器，刻度試管（或普通試管），試管架，移液管（10 ml、2 ml、1 ml），移液管架，吸水紙，洗耳球，黑紙，100 ml三角瓶，100 ml量筒。

3. 試劑及配制：

50μg· ml－1 α－萘胺母液的配制：精確稱取0.1000g分析純α－萘胺溶于約50 ml蒸餾水中（微微加熱），冷卻后定容至100 ml，即為1000μg· ml－1α－萘胺溶液，保存于棕色瓶中，置低溫黑暗處保存。使用前吸取1000μg· ml－1α－萘胺溶液50 ml加蒸餾水稀釋至1000 ml即為50μg· ml－1α－萘胺母液。

1％對氨基苯磺酸溶液配制：稱取1g對氨基苯磺酸溶于100 ml 30％乙酸中。

100μg· ml－1亞硝酸鈉溶液配制：稱取0.1g亞硝酸鈉溶于1000 ml蒸餾水中。

0.1mol·L－1磷酸緩沖液（pH7.0）：

A液：稱取純Na2HPO4·2H2O11.876g溶于蒸餾水中成1000 ml。

B液：稱取KH2PO49.078g溶于蒸餾水中成1000 ml。

用時取A液60 ml，B液40 ml混合即成。

二、實驗步驟

1.  α－萘胺標準曲線的制作

（1）取6支20 ml刻度試管，編號，按下表配制每管含量為0～50μg的α－萘胺標準溶液。

加入表中試劑后，搖勻，置于室溫（20～25℃）顯色5min，然后加入蒸餾水，使每管總體積為20 ml，搖勻，在20～60min內，以0號管為空白對照，在520nm波長處測定每管吸光度（A）值。

（2）標準曲線繪制

以1～5號管的α－萘胺含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標繪制標準曲線。

2. 根系處理及空白實驗

（1）把待測定水稻根用水洗凈，再用吸水紙吸干根上的水后，稱取1～2g，放入100 ml三角瓶中，加入50μg· ml－1的α－萘胺溶液和磷酸緩沖液的等量混合液50 ml輕輕搖動。

（2）靜置10min后，根的迅速吸附業以完畢，從瓶中取2 ml溶液放入20 ml刻度試管測定α－萘胺含量（見下方法3），以此作為開始值（第一次取液）。其余的溶液塞好瓶塞后，放在振蕩器上，在25℃下反應振蕩3～6 h（無振蕩器時，要在反應期間，定時搖動）。反應時間完畢后再取2 ml溶液放入刻度試管，待測（第二次取液）。因萘胺溶液會自動氧化，所以在做根系處理時要同時做無根的同樣操作的空白實驗。

3. 測定

在上述二次所取及二次空白實驗所取得2 ml測定液中，各加入10 ml蒸餾水，混勻后再加入1％對氨基苯磺酸1 ml和100μg· ml－1的亞硝酸鈉溶液1 ml。混勻，置室溫（20～25℃）顯色5min，然后加入蒸餾水，使總體積為20 ml，搖勻，在20～60min內，以標準曲線0號管為空白對照，在520nm波長處測定吸光度（A）值。

三、結果計算

根據第一次和第二次樣液所測得的吸光度值，從標準曲線查出α－萘胺含量，按下公式計算α－萘胺氧化值。



四、按下表記錄實驗數據及結果

作物根系活力測定（α－萘胺氧化值）記錄表

α－萘胺在空氣中會被自動氧化，注意保存。

1. α－萘胺標準曲線的制作參考：http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2015/01/A1420622582png_small.jpg

2. 計算α－萘胺氧化值公式

http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2015/01/B1420621392png_small.jpg

3. 作物根系活力測定（α－萘胺氧化值）記錄表

http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2015/01/A1420622588png_small.jpg

4. 更多可參考https://wenku.baidu.com/view/6535e846591b6bd97f192279168884868662b87f.html