α7nACh 受體的競爭性拮抗劑對實驗小鼠學習記憶能力的影響
摘要:目的 探討α7nACh 受體的競爭性拮抗劑(MLA) 對實驗小鼠在Morris 水迷宮中學習記憶能力的影響。
方法 雄性昆明小鼠每天腹腔注射MLA (110、418μg/ g ) ,連續8d ,采用Morris 水迷宮,通過定位航行、空間探索試驗觀察分析小鼠的學習記憶能力。結果 小鼠腹腔注射MLA 418μg/ g 與其余三組相比,尋找平臺潛伏期明顯延長( P < 0101) ,在目標象限游泳時間所占百分比也明顯降低( P < 0101) ,結論 腹腔注射MLA 418μg/ g的小鼠有學習和記憶能力的下降。
關鍵詞:α7nACh 受體的競爭性拮抗劑;Morris 水迷宮;學習記憶能力;小鼠
α7nACh 受體的競爭性拮抗劑是燕草屬植物飛燕草子(Delphinium spp1) 的提取物甲基牛扁亭(methyllycaconitine ,MLA) ,為一種植物毒素[1 - 2 ] 。近年來的動物實驗研究表明, MLA 通過對α7nACh 受體的競爭性拮抗, 導致動物認知功能障礙[3 - 4 ] 。本實驗采用腹腔注射法, 用Morris 水迷宮檢測小鼠的學習記憶能力, 擬建立一種模擬α7nACh 受體損傷的癡呆模型, 以進一步為研究α7nACh 受體在阿爾茨海默病等退行性神經系統疾病的作用機理和針對治療α7nACh 受體損傷的藥物開發提供實驗依據。
1 材料和方法
111 實驗動物和分組 選用健康雄性3 個月齡昆明小白鼠(購自寧夏醫學院實驗動物中心) 85 只,隨機選取35 只用于確定最大逃逸潛伏期實驗,其余50 只,在正式開始實驗的前一天,小鼠依次在Morris 水迷宮中自由游泳2min ,選取游泳姿勢和速度符合要求的小鼠40 只,隨機分為4 組,每組各10 只。1) 正常對照組:小鼠自由進食飲水,自然晝夜節律光照;2) 生理鹽水組:注射等量生理鹽水;3) 110μg/ g組:每天注射MLA 110μg/ g ,連續8d ;4) 418μg/ g 組:每天注射MLA 418μg/ g ,連續8d。
112 試劑和儀器 MLA:粉劑,購自Sigma 公司。Morris 水迷宮及微機生物機能系統,購自成都泰盟科技有限公司。
113 MLA 溶液制備及給藥劑量 臨用前將110μg/ g 和418μg/ g 的MLA 分別溶解于生理鹽水中,按011mL/ 10g 的
劑量連續注射8d。
114 Morris 水迷宮行為測定 水迷宮為圓形水池,池壁為乳白色,壁上標有東、南、西、北四個入水點,將水池等分為SW、MW、SE 及NE 四個象限,在SW象限正中放圓形透明平臺,平臺頂低于水面1cm ,水溫(26 ±1) ℃,水中加入適量牛奶,至看不清水下平臺。迷宮正上萬懸掛攝像機并連接計算機等記錄顯示系統,實驗期間保持環境安靜,迷宮外參照物(如門、窗、冰箱、電燈) 等保持不變。
11411 最大逃逸潛伏期的確定:選取的35 只小鼠,分上、下午兩個時段進行水迷宮訓練,每個時段訓練4 次,訓練時小鼠先自由游泳2min ,適應環境后將小鼠面向池壁放入水中,記錄每次從入水點至找到平臺的最大時限。訓練時操作者隨機選擇一個入水點,但在同一個訓練時段內,每只小鼠的入水點相同。120s 內找不到平臺,將小鼠引導至平臺上休息10s ,連續2d ,記錄找到平臺的時間。實驗結束后,
選取90 %以上小鼠找到平臺的時間,確定為最大逃逸潛伏期。
11412 注射MLA 動物定位航行試驗(place navigation) :將篩選并分組的小鼠,從第1 天起,按11411 方法訓練5d ,記錄潛伏期及游泳速度,取后3d 的算術平均值進行統計分析。注射MLA 后按同樣的方法繼續訓練,連續8d ,取8d 的算術平均值進行統計分析。
11413 注射MLA 動物空間搜索試驗( spatial probe test) :在訓練第5d 和注射MLA 8d 后,撤除水下平臺,于平臺象限池壁中點為入水點,記錄小鼠120s 內搜尋平臺在各象限的游泳時間。
115 統計學方法
所有數據用(.x ±s) 表示,采用單因素方差分析(Oneway ANOVA) ,方差齊性時,用LSD(Le Significant Difference)或Student Newman Keuls 檢驗進行兩兩比較,方差不齊時,用秩和檢驗,組間比較Kruskal Wallisttest。采用SPSS 1110 統計軟件對數據進行統計分析。