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  • 發布時間:2019-08-10 00:01 原文鏈接: λ噬菌體的大規模培養:低倍數感染

    材料:

    緩沖液和溶液:

    SM

    氯仿

    培養基:

    NZCYM

    載體和菌株:

    高滴度的λ噬菌體原種

    離心機和轉子:

    Sorvall  SS-34或相當型號

    專用設備:略

    方法:

    1、  接種大腸桿菌適宜菌株的單菌落至分裝在500ml錐形瓶的100mlNZCYM中,37℃劇烈振蕩培養過夜。

    2、  測定培養物的OD600值,以1OD600=1×109個細胞/ml計算細胞濃度.

    3、  取4份樣品,每份含1010個細胞,4000g(5800r/min 于Sorvall  SS-34)室溫離心10min,去上清。

    4、  將每份細菌沉淀用3ml SM懸浮。

    5、  加入適當數量的感染性噬菌體顆粒,振蕩使噬菌體充分分散于整個培養物中。

    6、  將感染培養物37℃溫育20min,間或搖晃。

    7、  將每份感染樣品加入到預熱至37℃的500ml NZCYM(于2L 燒瓶中),37℃劇烈振蕩培養(300r/min).

    8、  8h后開始監視培養物的裂解情況。伴隨著細菌和噬菌體的生長,8-12h后裂解發生,如果觀察大裂解發生,轉入步驟10.

    9、  假如12h后裂解不明顯,取小量培養物樣品,檢查噬菌體的生長情況。

    a.  取兩份感染培養物樣品(每份1ml)至玻璃試管中。

    b.  每管中加入1至2滴氯仿(約50-100ml),37℃培養5-10min,間或搖晃。

    c.  將每管置光線下比較培養物的外觀。如果接近完全感染但細胞還沒有裂解,氯仿將導致細胞破裂,從而使混濁的培養物變為透明。在這種情況下,轉入步驟10.

    10、每個燒瓶中加入10ml氯仿,37℃繼續振蕩培養10min。

    11、將培養物冷卻至室溫,隨之用方案6所述沉淀噬菌體顆粒。

     


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