(一) 原理
粒細胞系列的白血病細胞中形成的φ(Phi)小體與3,3,—二氨基聯苯胺(DAB)及(或)過氧化氫基質液作用,以及硝酸酮處理的氫過氧化酶染色,能催化DAB氧化生成藍色沉淀,定位于胞質中。
(二) 操作步驟
1 試劑配制
(1) 1.25%戊二醛固定液:0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(PH7.3)95ml,分析純戊二醛液(25%濃度)5ml,分析純純甲醛液(37%濃度)2ml,混勻并調整PH至7.3。
(2) 基質液: 3,3,—二氨基聯苯胺5mg,0.05mol/LTris-鹽酸緩沖液(PH7.6)10ml,1%過氧化氫溶液0.1ml,將以上三者混勻。
(3) 0.5%硝酸銅溶液:用0.05mol/LTris-鹽酸緩沖液(PH7.6)配制。
2 操作方法
(1) 新鮮干燥涂片放入1.25%戊二醛固定液中固定2分鐘。
(2) 用生理鹽水沖洗后保存在鹽水中。
(3) 浸入基質液中作用3分鐘。
(4) 用0.05mol/LTris-鹽酸緩沖液(PH7.6)快速沖洗3次。
(5) 放入0.5%硝酸銅溶液2分鐘。
(6) 用生理鹽水沖洗,晾干后鏡檢。
3 染色結果
陽性結果為胞質中出現1條至多條紡綞狀或細棒狀的棕色小體。
4 正常參考結果
正常人血液及骨髓中各類細胞均為陰性反應。
(三) 臨床意義
鑒別白血病類型:φ(Phi)小體是粒細胞系的白血病細胞一種病理改變所形成的,因此陽性結果僅在白血病細胞中出現,不但有助于白血病類型的鑒別,而且具有很強的病理價值。
(1) 急粒:白血性原粒細胞的胞質中φ(Phi)小體有較高的檢出率。
(2) 急性早幼粒細胞白血病:異常早幼粒細胞胞質中φ(Phi)小體檢出率高。
(3) 急淋:各階段淋巴細胞φ(Phi)小體為陰性。
(4) 急單:各階段單核細胞φ(Phi)小體為陰性。
備注:
1 所需試劑:分析純戊二醛,分析純純甲醛(有),PH計(有),3,3,—二氨基聯苯胺,過氧化氫(有),硝酸銅。
2 開展的項目可與四項組化一起檢查,收費定為20元/例,即細胞化學包括POX、PAS、AS-DCE、NBE、Phi小體。
3 Tris-鹽酸緩沖液(PH7.6)的配制。
4 普通參考書無此項目,一般醫院亦無此項目開展,可作課題有助于將來總結。