今天,我們繼續接著講化學染色方法之中性粒細胞堿性磷酸酶染色(偶氮偶聯法),昨天的你學到了嗎?(請耐心花2分鐘閱讀完本文,建議推薦給小伙伴一起學)
一、實驗原理
二、試劑
(1)固定劑:10%甲醛甲醇溶液
(2)Tris-Hcl緩沖液的配制:Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸餾水中,加濃HCL1-2滴,PH調至9.2,4℃保存!
(3)作用(基質液):
磷酸萘酚鈉 5mg
N-N二甲基酰胺 1ml
Tris-Hcl液 4ml
堅固藍RR鹽 5mg
(4)復染液:1%中性紅
三、實驗步驟
1、新鮮、干燥的外周血或骨髓涂片(標本片及對照片)加固定劑作用30秒(染缸),水洗待干;
2、滴加作用液,室溫染色15min,水洗待干;
3、1%中性紅復染1min
四、注意事項
(1) 重氮鹽以堅固藍RR鹽為最佳;
(2) 堅固藍RR鹽應適量:過多易造成染色失敗,過少使反應減弱;
(3) 每次都要做陽性對照;
(4) 作用液新鮮配制,配好后要立即使用
五、結果觀察
(對照片成熟中性粒細胞中出現棕黑色顆粒為陽性細胞,說明染色成功)
正常人除成熟中性粒細胞NAP可見陽性外,其它血細胞均為陰性。且正常陽性率<40%,積分值30~130分。
六、NAP陽性結果及積分判斷標準
“-” 0分,胞漿中無陽性顆粒
“+” 1分,胞漿中含有少量顆粒
“2+” 2分,胞漿中含有中等量顆粒
“3+” 3分,胞漿中含有豐富的顆粒,但胞核清楚
“4+” 4分,胞漿中含有豐富粗大的顆粒,但胞核不清楚
七、臨床意義
增高:細菌感染、類白、AA、急淋、慢粒急變、骨髓增殖性疾病,惡性淋巴瘤。
降低:慢粒、急粒、PNH、MDS、惡組