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  • 發布時間:2021-06-05 11:06 原文鏈接: 一套中性粒細胞堿性磷酸酶染色的詳細流程

    今天,我們繼續接著講化學染色方法之中性粒細胞堿性磷酸酶染色(偶氮偶聯法),昨天的你學到了嗎?(請耐心花2分鐘閱讀完本文,建議推薦給小伙伴一起學)

    一、實驗原理


    二、試劑

    (1)固定劑:10%甲醛甲醇溶液

    (2)Tris-Hcl緩沖液的配制:Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸餾水中,加濃HCL1-2滴,PH調至9.2,4℃保存!

    (3)作用(基質液): 

    磷酸萘酚鈉      5mg

    N-N二甲基酰胺    1ml

    Tris-Hcl液       4ml

    堅固藍RR鹽       5mg

    (4)復染液:1%中性紅

    三、實驗步驟

    1、新鮮、干燥的外周血或骨髓涂片(標本片及對照片)加固定劑作用30秒(染缸),水洗待干;

    2、滴加作用液,室溫染色15min,水洗待干;

    3、1%中性紅復染1min

    四、注意事項

    (1) 重氮鹽以堅固藍RR鹽為最佳;

    (2) 堅固藍RR鹽應適量:過多易造成染色失敗,過少使反應減弱;

    (3) 每次都要做陽性對照;

    (4) 作用液新鮮配制,配好后要立即使用

    五、結果觀察

    (對照片成熟中性粒細胞中出現棕黑色顆粒為陽性細胞,說明染色成功) 

    正常人除成熟中性粒細胞NAP可見陽性外,其它血細胞均為陰性。且正常陽性率<40%,積分值30~130分。

    六、NAP陽性結果及積分判斷標準

    “-”  0分,胞漿中無陽性顆粒

    “+”   1分,胞漿中含有少量顆粒

    “2+”  2分,胞漿中含有中等量顆粒

    “3+”  3分,胞漿中含有豐富的顆粒,但胞核清楚

    “4+”  4分,胞漿中含有豐富粗大的顆粒,但胞核不清楚

    七、臨床意義

    增高:細菌感染、類白、AA、急淋、慢粒急變、骨髓增殖性疾病,惡性淋巴瘤。

    降低:慢粒、急粒、PNH、MDS、惡組


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