丁型肝炎的特異性診斷方法為從肝臟和血清檢測HDAg或HDV-RNA，或從血清檢測抗-HD、抗-HDIgM，均做為診 斷的依據。
1、HDAg
用免疫酶法或放射免疫法檢測血清HDAg，如為陽性，有助于早期診斷。慢性HDV感染時，由于血清中抗-HD滴度高，HDAg多以免疫復合物形成存在，須用免疫印跡法（WesternBlot）分離HDAg，方法較復雜。肝內HDAg可用免疫熒光法或免疫組化技術檢測，可發現HDAg位于肝細胞核內或位于肝細胞漿中，有利于診斷。
2、抗-HD、抗-HDIgM
可用免疫酶聯法或放射免疫法檢測血清抗-HD，是診斷丁型肝炎常用的方法。于急性HDV感染的3～8周內，絕大多數均可檢出抗-HD，可持續至恢復期，由于個例其抗-出現時間與程度不同，在急性感染時數周內須多次檢測。抗-HDIgM出現較早，一般持續2～20周，用于早期診斷。高滴度抗HDIgM是診斷急性丁型肝炎的標志。當慢性HDV感染或HDV重疊感染時，抗-HD和抗-HDIgG是識別慢性丁型肝炎的主要標志。目前檢測的抗-HDIgG是識別慢性丁型肝炎的主要標志。目前檢測的抗-HD，實際以IgG型為主。
3、HDV-RNA
采用cDNA探針斑點雜交法檢測；肝組織內HDV-RNA用原位雜交或轉印雜交法檢測。HDV-RNA用原位雜交或轉印雜交法檢測。HDV-HDV陽性是HDV復制和HDV感染的直接證據。檢測血清HDV-RNA可用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR法）。
總之，血清學檢測，可檢出部分HDV感染的患者，尚有相當一部分患者只有從肝組織檢測HDAg才能確診。