五、血清游離甲狀腺激素(FT3、FT4)測定
(一)原理
T4由甲狀腺分泌進入血循環，絕大部分立即與血漿蛋白相結合。血循環中的T3一部分來自甲狀腺，大部分由T4在血循環中脫碘轉換而成。游離型T3(FT3)和游離型T4(FT4僅分別占總T3、T4的0.4％及0.04％。但只有游離型甲狀腺激素進入靶器官細胞內發揮生理作用，并且不受TBG濃度變化的影響。因此，血清FT3、FT4的濃度能最直接和較正確地反映甲狀腺功能狀態。
(二)性能?
1．TBG正常時，FT3、FT4的性能基本同TT3、TT4，但FT3、FT4診斷準確率高于TT3、TT4，是診斷亞臨床甲亢和亞I臨床甲低的靈敏指標。
2．由于血清FT3、FT4測定結果不受TBG濃度變化的影響，在家族性TBG增高癥，妊娠；服用雌激素和避孕藥等致TBG容量增加，以及在家族性TBG減少癥，低蛋白血癥，服用雄激素和糖類皮質激素等致TBG容量減少的情況下，是反映甲狀腺功能的正確指標。
(三)血清FT4測定的操作方法
按試劑盒的說明書進行操作；現以一種常用的固相RIA試劑盒為例說明：
1．試劑盒組成
(1)游離T4抗體——包被試管：100支T4抗體包被聚丙烯包被試管，包裝在拉鎖袋中。冷存，防潮。打開后要仔細重新封好。從制作日期開始，在2—8℃可穩定至少一年。顏色為淺黃色。
(2)[125I]游離T4：一瓶碘標記T4凍干粉，每瓶加110ml蒸餾水重新配制。靜置10分鐘，然后翻轉混勻。重新配制后在2—8℃保存可穩定至少30天或到瓶上標明的有效期內。
(3)游離T4標準品；一套七瓶游離T4標準品凍干粉A至G。至少於使用前30分鐘向零標準品中加入2.0ml蒸餾水，其余B至G各加入1.0ml蒸餾水，用移液管輕輕混勻。重新配制后在2—8℃冷存，可穩定至少30天。
標準品濃度分別為0、0.1、0.5、1. 3、2.2、4.8和10ng／d1。
2．分析步驟
(1)空白管：成對標號4支空白(未包被)12X 75mm聚丙稀試管，用于T(總計數)和NSB(非特異結合)。
包被管：成對標號14支游離T4抗體—包被試管：A(最大結合)，B至G。成對標號其他抗體—包被試管用于質控和病人樣品
(2）向NSB和A管中加入50μl零標準品A，向其他試管加入50μl相應的標準品、質控和病人樣品。
（3)向每支試管加入1.0ml[125I])游離T4，振蕩。
(4)37℃水浴溫育1小時。
(5)完全傾去溶液。
(6)在丫計數器上計數1分鐘。
3．結果計算
為了從logit-log坐標曲線上計算游離T4濃度，首先計算每對試管1分鐘平均計數，然后計算每對試管相對於最大結合(MB)的百分結合率，A管的百分結合率為100％。
凈計數
百分結合率＝－－－－－－－－×100％
凈MB計數
使用logit-log坐標紙。以百分結合率為縱坐標，以游離T4濃度為橫坐標，對B至G標準品的實驗結果作圖，標準曲線應為近似連結6點的直線。未知樣品的游離T4濃度可以通過內插法從該直線估算。
4．參考值
0.8——2.0ng／d1。
(四)血清FT3測定操作方法。
按試劑盒的說明書進行操作。現以一種常用的固相RIA試劑盒為例說明：
1．試劑盒組成
(1)游離T3抗體一包被試管：100支T3抗體包被聚丙烯包被試管，包裝在拉鎖袋中。冷存，防潮。打開后要仔細重新封好。從制作日期開始，在2—8℃可穩定至少一年。顏色為l藍色
(2) [125I]游離T3：一瓶碘標記T3凍干粉，每瓶加入110ml蒸餾水重新配制。靜置10分鐘，然后翻轉混勻。重新配制后在2—8℃保存可穩定至少30天，或到瓶上標明的有效期內。
(3)游離T3標準品：一套游離T3標準品凍干粉七瓶：A至G。至少使用前於30分鐘向零標準品A中加入2.0ml蒸餾水，其余B至G加1．0ml蒸餾水重新配制，用移液管輕輕混勻。重新配制后在2—8℃冷存，可穩定至少30天。
標準品濃度分別為0、0．5、1．6、3．5、7．0、21和42pg／m1。
2．分析步驟
(1)空白管，成對標號4支空白(未包被)12X75mm聚丙烯試管，用于T(總計數)和NSB(非特異結合)。
包被管：成對標號14支游離T3抗體—包被試管：A(最大結合)，B至G。成對標號其他抗體—包被試管用于質控和病人樣品的檢測。
(2)向NSB和A管中加入100μ1零標準品A，向其他試管加入100μ1相應的標準品、質控和病人樣品。
(3)向每支試管中加入1.0mli[125I]游離T3振蕩。
(4)在37℃水浴溫育1小時。
(5)完全傾去溶液。
(6)在丫數器上計數1分鐘。
3．結果計算
參照血清FT4固相RIA法
4．參考值
1.4——4.4pg／m1。