三葉青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et. Gilg)是葡萄科崖爬藤屬植物,具有多種功效,是頗具前景的藥用植物資源。但是,有關三葉青的抗氧化、抑菌活性與誘導人宮頸癌HeLa細胞凋亡作用機理研究尚未有報道,因此,本文對三葉青萃取物的生物活性及其誘導HeLa細胞凋亡作用機理進行了相關研究,研究結果如下：1.采用經典的天然藥物化學提取、系統溶劑分離方法對三葉青塊根進行提取分離后得到Ⅰ石油醚萃取物(Petroleum Ether Fraction, PEF)、Ⅱ氯仿萃取物(Chloroform Fraction, CFF)、Ⅲ乙酸乙酯萃取物(Ethyl Acetate Fraction, EAF)、Ⅳ正丁醇萃取物(n-Butanol Alcohol Fraction, BAF) 、V水萃取物(Aqueous Fraction, AF)。2.采用DPPH法、ABTS法、FRAP法系統地評價了三葉青各萃取物的抗氧化活性。結果表明,在0.25 mg/ml-2.0 mg/ml濃度范圍內,EAF萃取物顯示出較強的抗氧化活性；進一步采用柱層析、重結晶等方法,對EAF萃取物的化學成分進行分離純化,最終得到2個化合物,鑒定為槲皮素和β-谷甾醇。3.本研究選用了金黃色葡萄球菌CLMA 1213)、枯草芽孢桿菌(LMA 0106)、大腸桿菌(LMA 1226)、沙門氏菌(LMA 0217)、肺炎克雷伯桿菌(LMA 0725)5種細菌,總狀毛霉(LMA 3221)、桔青霉(LMA 7126)、米根霉(LMA 2429)、黃曲霉(LMA0816)和黑曲霉(LMA 3601)5種霉菌作為測試菌。研究結果表明,CFF萃取物對金黃色葡萄球菌(LMA 1213)以及枯草芽胞桿菌(LMA 0106)的抑制能力最強,MIC值為62.5 μg/ml;EAF萃取物對大腸桿菌(LMA 1226)、沙門氏菌(LMA 0217)、肺炎克雷伯桿菌(LMA 0725)的抑制作用較強,MIC值的范圍在125 μg/ml-250 μg/ml之間：CFF萃取物對霉菌的抑制作用最強,MIC值的范圍在31.3 μg/ml-125 μg/ml之間。4.本研究采用MTT法篩選出三葉青CFF萃取物、PEF萃取物和EAF萃取物對人宮頸癌HeLa細胞具有較強的抑制作用,其IC50值分別為8.59 ± 0.98 μg/ml、121.40±1.27 μg/ml和148.54 ± 1.78 μg/ml,BAF萃取物和AF萃取物對HeLa細胞的抑制作用較弱。三葉青萃取物對人腎上皮HEK-293細胞增殖無明顯抑制作用。5.PEF萃取物和CFF萃取物可使HeLa細胞的乳酸脫氫酶(LDH)釋放率顯著增加(p0.01),表明兩者均能導致HeLa細胞損傷的發生。但低濃度EAF萃取物未檢測到LDH釋放,直到濃度達到160 μg/ml時才出現LDH釋放率的增加,但結果遠低于PEF萃取物和CFF萃取物,表明EAF萃取物未對HeLa細胞造成明顯損傷。6.本研究探討了PEF萃取物和CFF萃取物誘導HeLa細胞的凋亡作用。實驗表明,在10μg/ml、 20μg/ml和40 μg/ml PEF萃取物和CFF萃取物作用下,HeLa細胞的早期凋亡率、△ψm損失率顯著下降,和對照組相比,結果具有顯著性差異(p0.05)。PEF萃取物和CFF萃取物對HeLa細胞具有特異性細胞周期阻滯作用,阻滯作用分別發生在G2/M期和G0/G1期。PEF萃取物和CFF萃取物可以激活Caspase-3、 Caspase-8、 Caspase-9蛋白酶的表達,表明PEF萃取物和CFF萃取物通過線粒體途徑誘導了HeLa細胞凋亡,死亡受體凋亡途徑也可產生協同作用。PEF萃取物和CFF萃取物均能導致SOD、CAT、GSH-pX酶活性下降,MDA含量增加,表明氧化應激參與了三葉青萃取物誘導HeLa細胞凋亡過程。7.本研究采用GC-MS分析了三葉青PEF萃取物的化學成分,共檢出80個色譜峰,鑒定了其中的30個化合物。結果顯示,PEF萃取物中脂肪酸和甾醇的含量較高,主要包括棕櫚酸15.67%,亞油酸16.54%,油酸17.72%,麥角甾醇1.58%,β-谷甾醇10.29%。