三種常用免疫電泳技術

免疫電泳技術是電泳分析與沉淀反映的結合產物。這種技術有兩大優點，一是加快反應的速度，二是將某些蛋白組分利用其帶電荷的不同而將其分開，再分別與抗體反應，以此做更細微的分析。免疫電泳技術的種類有很多，這里僅將常用的技術介紹如下： 
一、放射免疫電泳技術 
將放射性元素標記的抗體（或抗原）與相應的抗原（或抗體）沉淀時，沉淀線通過自顯影而證實。所謂自顯影，就是通過復合物中的標記同位素在蛻變過程中放出的射線，作用于感光材料的鹵化銀晶體而產生潛影，再經過顯影把“像”顯示出來。這樣，能檢出肉眼看不見的沉淀線，從而提高反應的敏感性，這種方法可應用于凝膠中的所有反應。 
免疫電泳中所使用的材料有 
1．放射性同位素標記的抗原或抗體 
2．X—射線膠片或全色膠片 
3．顯影液與定影液 
4．其它同對流免疫電泳 
具體操作方法為： 
1．按對流免疫電泳制備凝膠板并打孔。 
2．加樣  陰極端孔內加抗原，陽極端孔內加抗體。在加被檢抗體樣品時，迅速加入標記抗原（2000~3 000cpm），并使之混合，勿使抗原吸收后再標記抗原，以免由于標記原的滯面而形成假陽性。
3．電泳  電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。 
4．電泳后，平板浸在3％HCl中漂洗8h，換液2次。 
5．用流水漂洗過夜。 
6．干燥  室溫或鼓風機吹干。 
7．曝光  在暗室將膠片切成與平板一樣大小，然后將藥面密接凝膠面，再在膠片上壓一張玻板，用黑布包嚴，皮筋扎緊，曝光時間與所用同位素及保存期有關。181I，一周內5h~10h；1~2周內24h；2~3周內48h。125I，在2個月內10h。 
8．沖洗  全色膠片沖片方法，水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干，觀察結果。 
結果判定 
   在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者，判為陽性。二、對流免疫技術 
對流免疫電泳技術實質上是定向加速度的免疫雙擴散技術，其基本原理是：在瓊脂板上打兩排孔，左側各加入待測的抗原，右側孔加入相應的抗體，抗原在陰極側，抗體在陽極側。通電后，帶負電的抗原泳向陽極抗體側，而抗體籍電滲作用流向陰極抗原側，在兩者之間或抗體的另一側（抗原過量時）形成沉淀線 
材料 
1．1%，PH8.6，0.075M巴比妥緩沖液。 
2．抗AFP血清，已知AFP陽性血清，待檢病人血清。 
3．玻片、吸管、打孔器、毛細滴管、電泳儀等。 
方法 
1．將用緩沖液配制好的1.2%瓊脂隔水加熱溶化，趁熱吸取3.5ml加于玻片上，冷凝后打孔，孔直徑3毫米，二孔間距離3毫米。 
2．分別從上至下向左列1、3、5孔內加入抗AFP血清；向右列2孔內加待檢病人血清，4孔內加已知AFP陽性血清作為陽性對照，6孔內加已知陰性對照血清。各孔加滿為度，勿使外溢。 
3．將瓊脂板置于電泳槽內，抗原端入陰極側，抗體放陽極側，二端貼上浸透電泳緩沖液的4層紗布條。 
4．通電，固定電壓5-6伏/厘米長，通電45~60分鐘左右。           
結果觀察 
電泳畢，關閉電源，取出瓊脂板。在黑色背景上方，透過散射光線，首先觀察3與4孔間（陽性對照組）、5與6孔間（陰性對照組）的白色沉淀線是否出現；再看試驗孔，如孔間未出現這樣的沉淀線，則該待檢血清為AFP陰性血清。

三、火箭免疫電泳 
火箭免疫電泳又稱作單向電泳擴散免疫沉淀試驗，是將電泳與單向擴散結合的一種免疫技術，實際上是加速度的單向擴散。將抗體溶入瓊脂后制板，在瓊脂板的一側打孔，加入待檢樣品及不同濃度的標準抗原。電泳時抗原在含定量抗體的瓊脂中向正極移動，并形成濃度梯度，在適宜的部位形成火箭狀的沉淀峰。沉淀峰的高度與抗原的含量成正比，故可定量測定抗原。 
方法： 
1、制備瓊脂板 
將抗體血清按一定比例與溶化好的1.5%瓊脂在56℃水浴中混勻，迅速澆注成2毫米厚的瓊脂板。 
2、打孔 
3、加樣：分別加入已知濃度的標準抗原溶液和待測抗原，每孔10微升。 
4、電泳：將瓊脂板放入電泳槽，抗原放陰極側，抗體放陽極側，兩端貼上浸透電泳緩沖液的4層紗布條。固定電壓5~6伏/厘米長，通電時間為45~60分鐘左右，觀察結果。  
火箭電泳操作應注意以下幾點： 
1.所用瓊脂可選擇無電滲或電滲很小的。否則火箭形狀不規則。 
2.注意電泳終點時間，如火箭電泳頂部呈不清楚的云霧狀或圓形皆提示未達到重點。 
3.標本數量多時，電泳板應先置電泳槽上，搭橋并開啟電源后加樣。否則容易形成寬底峰形，使定量不準。 
4.做IgG定量時，由于抗原和抗體的性質相同，火箭峰一電滲呈紡錘狀。為了矯正這種現象，可用甲醛與IgG上的氨基結合（甲基化），使本來帶兩性電荷的IgG變為只帶負電荷，加快了電泳速度，抵消了電滲作用，而出現伸向陽極的火箭峰。