基本方案
| 實驗方法原理 |
丙烯酰胺的聚合已經應用于聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE),也應用于酶的包埋。長的聚合物鏈通過交聯 N,N'-亞甲基二丙烯酰胺連接而成(圖 1)。聚合反應是通過N,N,N',N'-四甲基乙二胺(TEMED)和過硫酸銨引發的。通過改變交聯劑的數量,可以控制聚合物網孔尺寸,以此確定酶被固定而底物和產物能從催化位點自由地擴散。
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| 實驗材料 | 酶溶液 |
| 試劑、試劑盒 | 丙烯酰胺 NN'-甲基丙烯酰胺 NNN'N'-四甲基乙二胺 過硫酸銨 Tris-HCl 磷酸鉀 |
| 儀器、耗材 | 高速攪拌器 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 在 8 ml 的酶溶液中,加入 1.5 g 的丙烯酰胺、80 mg 亞甲基二丙烯酰胺、10 ul 四甲基乙二胺和 30 ul 10% 過硫酸銨。反應的混合物被控制在 37℃,還必須避免溫度的升髙。聚合在 20 min 內發生。然后,用抹刀把凝膠切割成小片,再添加 10 ml pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸鉀緩沖液,凝膠粒子被高速攪拌器進一步地磨碎。凝膠微粒在玻璃料上被沖洗三次,之后直接用于酶的測試。
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| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑: 丙烯酰胺(Mr=71.1) N,N'-甲基丙烯酰胺(Mr=154.2) N,N,N',N'-四甲基乙二胺(TEMED,Mr=116.2) 過硫酸銨(過硫酸銨 Mr=228.2,10% 水溶液,新鮮配制) 0.1 mol/L Tris-HCl pH 7.2 0.1 mol/L 磷酸鉀,pH 7.5 0.1 mol/L 酶溶液(8 mg 溶于 8 ml 0.1 mol/L Tris-HCl pH 7.2)
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