丙酮酸脫羧酶的測定實驗

在酶測定中二氧化碳的釋放可以用壓力計或 ¹⁴C1-丙酮酸鹽測定。在此將描述一個與ADH 有關的實驗。

酶樣品

檸檬酸緩沖液丙酮酸焦磷酸硫胺素MgCl2NADHADH

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml 實驗混合物

0.02 ml 酶樣品

記錄 340 nm、25℃ 處吸光值的減少，ε_340＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

試劑：

0.2 mol/L 檸檬酸緩沖液，pH 6.0

1 mol/L 丙酮酸（丙酮酸鈉，Mr＝110.0；1.1 g 溶于 10 ml H₂O）

0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素（ThDP，脫竣輔酶，Mr＝460.8；46.1 mg 溶于 10 ml H₂O）

0.1 mol/L MgCl₂（MgCl₂·6H₂O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml H₂O）

0.01 mol/L NADH（二鈉鹽，Mr＝709.4；71 mg 溶于 10 ml H₂O）

ADH 來自酵母（20 mg/ml）