用酶或微生物細胞作催化劑,使葡萄糖或三羧酸循環的某些中間代謝產物,在一定條件下,轉化為丙酮酸的技術,稱為酶催化法。其主要過程是先進行小規模的微生物培養,菌體收集,直接轉化或用載體包埋成固定化酶,然后轉化生成丙酮酸。酶催化法設備投資小,能耗低,轉化率高,但底物來源較窄、成本比較高約5萬元每噸,因此其進一步推廣受到限制。