照高效液相色譜法(通則0512)測定。臨用新制。溶劑見有關物質項下供試品溶液取本品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.8mg的溶液,精密量取1ml,置10ml棕色量瓶中,用溶劑稀釋至刻度,搖勻。對照品溶液取兩性霉素B對照品適量,精密稱定,置棕色量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.8mg的溶液,精密量取1ml,置10ml棕色量瓶中,用溶劑稀釋至刻度,搖勻色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-磷酸溶液(pH1.00±0.05)(370:630)為流動相;流速為每分鐘0.8ml;柱溫為25℃;檢測波長為383nm;進樣體系統適用性要求對照品溶液色譜圖中,兩性霉素B峰與相鄰雜質峰間的分離度應符合要求。測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算。每1mg的C4H73NO17相當于1049兩性霉素B單位。