中和反應(neutrallzationreaction)技術

病毒或毒素與相應的抗體結合后，失去對易感動物的致病力，謂之中和試驗。本試驗主要用于：（1）從待檢血清中檢出抗體，或從病料中檢出病毒，從而診斷病毒性傳染病；（2）用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細菌的毒素類型；（3）測定抗病毒血清或抗毒素效價；（4）新分離病毒的鑒定和分型，中和試驗不僅可在易感的實驗動物體內進行，亦可在細胞培養上或雞胚上進行。試驗方法主要有簡單定性試驗、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。
 
1、簡單定性中和試驗
 
本法主要用于檢出病料中的病毒，亦可進行初步鑒定或定型。先根據病毒易感性選定試驗動物（或雞胚、細胞培養）及接種途徑。將病料研磨，并稀釋成一定濃度（約100 LD50～1000LD50或TCID50）。污染的病料需加抗生素（青霉素、鏈霉素各200～1000單位），或用細菌濾器過濾，與已知的抗血清（適當稀釋或不稀釋）等量混合，并用正常血清加稀釋病料作對照。混合后置 37℃1h，分別接種實驗動物，每組至少3只。分別隔離飼喂，觀察發病和死亡情況。對照動物死亡，而中和組動物不死，即證實該病料中含有與該抗血清相應的病毒。本法亦可用于毒素（如肉毒毒素）的鑒定和分型。
 
2、固定血清稀釋病毒法
 
本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清（對照組），第二列加待檢血清（試驗組）。混合后，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗動物，每一稀釋度用3～5只動物。接種后，逐日觀察，并記錄其死亡數，觀察結束后，計算LD50和中和指數（表 1、表2），本法適用于大量檢樣的檢測。

中和指數＝中和組LD₅₀/對照組LD₅₀=10^-2.2/10^-5.5=10^3.3，查3.3反對數是1.995，故中和指數10^3.3＝1.995。也就是說該待檢血清中和病毒的能力為正常血清的1.995倍。本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體，對病毒而言，通常中和指數大于50者判為陽性，10～49為可疑，小于 10為陰性。

3、固定病毒稀釋血清法

本法用以測定抗病毒血清的中和價，將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價的病毒液（與血清混合后，每一接種劑量含病毒100LD₅₀），搖勻后，置37℃作用1h，接種實驗動物（表3）。

4、空斑減少法

在細胞培養上進行病毒中和試驗，近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當濃度，使每0.2ml含80個～100個PFU（空斑形成單位），與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h～2h，分別測定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價。見表4。