中性粒細胞堿性磷酸酶快速染色法的研究(2)

　　三、討論

　　堿性磷酸酶(ALP)催化β-甘油磷酸鈉生成甘油和無機磷酸根，AMP作為磷酸基受體，能不斷結合磷酸根，加快正向反應速度。磷酸基受體在酶上有結合位點，且遵循Michatelis-Menten動力學，在ALP的催化機理中，轉磷酸反應比磷酸水解反應擁有更高的Vmax，因此ALP更易將磷酸根轉移到受體上，當有合適的磷酸基受體存在時，ALP酶促反應有較高的Vmax/Km值，反應速度會顯著增加。

　　磷酸基受體與水竟爭結合共價吸附于酶活性部位絲氨酸上的磷酸根，必須依賴高濃度磷酸基受體才能顯著增加酶促反應速度。但高濃度磷酸基受體也會引入抑制酶活性的雜質。此外，磷酸基受體亦用作緩沖體系，調節反應的pH，而且更重要的是pH對磷酸鈣溶解度的影響，即pH太低會使磷酸鈣溶解度增加，導致假定位或假陰性。反之pH太高會導致陽性顆粒散于細胞外，或造成細胞膜不同程度的破壞。因此，維持一定pH(9.6±0.2)十分重要。

　　該法基質緩沖液配制簡便，AMP作為磷酸基受體加快了反應速度，因而，孵育時間僅需15 min；采用5 g/L沙黃溶液復染，便于對比觀察；整個實驗可在30 min內完成，具有簡便、快速的特點。