實驗原理
偶氮偶聯法（Kaplow法）：中性粒細胞胞漿中的堿性磷酸酶在pH 9.2-9.8緩沖液中，能水解磷酸萘酚鈉，并釋放出磷酸與萘酚。再以重氮鹽與萘酚偶聯成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞漿中。
實驗方法
材料：
1. 10%甲醛甲醇固定液
甲醛 10 ml
甲醇 90 ml
20C ~80C避光保存。
2. 丙二醇緩沖液
(1) 貯備液(0.2 mol/L)
2-氨基-2甲基-1，3-丙二醇 10.5 g
蒸餾水 加至500 mL
溶解后保存冰箱內。
(2) 應用液(0.05 mol/L，pH 9.75)
0.2 mol/L貯存液 25 mL
0.1 mol/L鹽酸 5 mL
蒸餾水 加至100mL
3. 基質孵育液(pH9.5-9.6)–磷酸萘酚鈉20 mg溶于0.05 mol/L丙二醇緩沖液20 mL，再加堅牢紫醬GBC(或重氮堅牢藍)20 mg混合后用濾紙過濾，用前臨時配制。
4. 1 g/L蘇木素復染液 取1g蘇木素加到蒸餾水500 mL中，加熱煮沸，使蘇木素溶解，再加入蒸餾水500 mL、碘酸鈉200mg、硫酸鋁鉀50 g，充分混勻，置棕色玻璃中室溫保存，使用前過濾。
方法：
1．固定 新鮮干燥的涂片用10%甲醛固定注液固定30s，蒸餾水輕輕沖洗30～60s，待干。
2．顯示 把涂片浸入基質孵育液中，在室溫下溫育10～15min(冬季放孵育箱溫育)。蒸餾水沖洗2min。
3．復染 置蘇木素復染液復染5～8min，蒸餾水沖洗1～2min，待干，鏡檢。
實驗結果計算
堅牢藍RR陽性為紫黑色顆粒，
堅牢紫醬GBC陽性為棕紅色沉淀。
（-） 0分：陰性反應，胞漿中無陽性染色顆粒。
（+） 1分：胞漿中含有少量顆粒或呈彌散淺紅色（或彌散紫色）。
（++） 2分：胞漿中含有中等量顆粒或彌散受色。
（+++） 3分：胞漿中有豐富的顆粒或彌散深色，胞核清晰。
（++++）4分：有極豐富的粗大顆粒，充滿胞漿，或彌散深色，胞核不清晰。
NAP積分：
計數100個成熟中性粒細胞，按其反應強度分級，各級百分率與其級數乘積的總和，即為積分。
例如： NAP反應結果（%）
（-） （+） （++） （+++） （++++）
20 40 20 15 5
積分=（0×20）+（2×20）+（3×15）+（4×5）=145
陽性率為80%。
注意事項
1.堅牢藍等重氮鹽的質量好壞是NAP染色成敗的關鍵；
2. 基質孵育液必須臨用前新鮮配制；
3. 所用的片子要新鮮。固定后一般在一周內染色。做NAP染色時，最好選擇其他患者的片子作為陽性對照；
4. NAP染色以陽性率及積分報告結果。