1.分組、模型復制及給藥 取 SD 大鼠 48 只，隨機 分為 6 組（每組 8 只），即正常對照組，模型組，陽性藥秋水仙堿組（0.1 g·kg-1），虎杖 - 桂枝低、中、高 劑量組（3.5，7，14 g·kg-1，分別相當于成人臨床劑量
1.1，2，4 倍）。正常對照組和模型組給予等量的生 理鹽水，其他各組給予相應藥物灌胃，每天 1 次，連 續 7 d。于灌胃的第 4 天給藥之前先測量大鼠右后足 趾容積，灌胃 1 h 后除正常對照組外，其余各組大鼠 乙醚麻醉，6 號針頭針口斜面朝前上方與脛骨呈 45°夾角刺入右踝關節腔， 一次性注入 25 mg·mL-1 的 MSU 溶液 0.2 mL， 復制大鼠急性痛風性關節炎模型，并于造模后 2，6，24，48，72 h 分別在受試大 鼠踝關節相同部位，用足趾容積測量儀測量其容積。
1.樣本采集及指標的檢測 第 7 天給藥后 1 h，眼 眶取血置于 EP 管和 EDTA-2K 抗凝管中，Elisa 試劑 盒檢測 IL-1β 和 TGF-β 含量；Ficoll 法分離外周血單核細胞[8]，采用 Trizol 法提取單核細胞的總 RNA，測 定 OD260 nm/OD280 nm 為 1.8~2.0 者采用，進行逆轉錄操作，嚴格按照試劑盒說明書進行，熒光定量 PCR 檢 測 TLR2、TLR4、MyD88 表達水平。引物由寶生物 工程（大連）有限公司設計及合成， 以 β-actin 基因 序列為內參照物，引物序列見表 1。反應采用 20 μL 反應體系，嚴格按照 SYBR Premix Ex TapTM Ⅱ試劑 盒說明書進行。設置空白對照組的基因表達水平為1。公式 2- Ct=2-{ [Ct（ 給藥組）- Ct（ 對照組）]} 目的基因 - {[Ct（ 給藥組）- Ct（ 對照組）]}β-actin。處死大鼠，取右后踝關節，多聚甲醛溶液固定 24 h，置于 150 g·L-1 乙二胺四乙 酸（EDTA）中脫鈣 1 周，常規脫水，石蠟包埋，經髁 突矢狀面低溫連續切片，厚度為 5 μm，HE 染色， 于光鏡下觀察病理組織形態學變化。
1.6 統計學處理方法 數據采用 SPSS19.0 統計軟件 進行分析，結果以“x ± s”表示，方差齊性使用 LSD法進行比較，分級組間多重比較采用非參數秩和檢驗。
2 結果
2.1 藥對虎杖-桂枝對急性痛風性關節炎大鼠足趾容
表 1 引物序列
Table 1 Primer sequences for PCR
基因 引物序列
β-actin F：5’-TgAgACCTTCAACACCCC-3’
R：5’-gCCATCTCTTgCTCgAAgTC-3’
TLR2 F：5’-ggCCACAggACTCAAgAgCA-3’
R：5’-AgAggCCTATCACAgCCATCAAg-3’
MyD88 F：5’- TATACCAACCCTTGCACCAAGTC-3’
R：5’- TCAGGCTCCAAGTCAGCTCATC-3’
TLR4 F：5’- CTCACAACTTCAGTGGCTGGATTTA-3’
R：5’- GTCTCCACAGCCACCAGATTCTC-3’
積的影響 與正常對照組比較，模型組在造模后不同 時間點大鼠足趾容積顯著增大，差異有統計學意義 （P＜0.05）；與模型組比較，在造模后 2 h 與 6 h，虎 杖 - 桂枝低、中劑量藥對組大鼠足趾容積顯著減小， 差異有統計學意義（P＜0.05）；造模后 48 h 與 72 h 虎杖 - 桂枝藥對低、中、高劑量組大鼠足趾容積均 顯著減小，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表 2。
表 2 各組對急性痛風性關節炎大鼠不同時間點足趾容積率的比較（x ± s，n=8）
Table 2 Effect of herb pair Huzhang- Guizhi on the digital volume of rats with acute gouty arthritis induced by sodium urate at different
times
組別 | 劑量 / g·kg-1 | 足趾容積率 /% | ||||||
0 h | 2 h | 6 h | 24 h | 48 h | 72 h | |||
正常對照組 | 2.09±0.06 | 2.12±0.06 | 2.070±0.08 | 2.092±0.06 | 2.099±0.06 | 2.100±0.08 | ||
模型組 | 2.14±0.08 | 3.24±0.53* | 3.361±0.66 * | 3.692±0.65* | 2.664±0.31* | 2.470±0.24* | ||
秋水仙堿組 | 0.1 | 2.05±0.14 | 2.65±0.47▲ | 2.779±0.64▲ | 3.130±0.53 | 2.348±0.28▲ | 2.282±0.15▲ | |
虎杖 - 桂枝低劑量組 | 3.5 | 2.05±0.12 | 2.77±0.52▲ | 2.980±0.48▲ | 3.107±0.59 | 2.456±0.26▲ | 2.313±0.17▲ | |
虎杖 - 桂枝中劑量組 | 7 | 2.10±0.13 | 2.75±0.39▲ | 2.890±0.59▲ | 3.086±0.47 | 2.404±0.35▲ | 2.275±0.24▲ | |
虎杖 - 桂枝高劑量組 | 14 | 2.04±0.15 | 3.09±0.44 | 3.353±0.50 | 3.517±0.49 | 2.544±0.31▲ | 2.352±0.18▲ | |
注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05。 | ||||||||
2.2 滑膜組織學變化 | 見圖 1。正常對照組膝關節軟 | 膜細胞呈灶性增生，炎細胞彌漫性浸潤，浸潤的細胞 |
組織未見異常，滑膜組織光滑完整，軟組織內可見正 主要為中性粒細胞﹑淋巴細胞。各給藥滑膜及周圍軟常血管，纖維結締組織無炎細胞浸潤。模型組滑膜及 組織內見少量 - 中等量炎細胞浸潤，部分小血管擴周圍軟組織廣泛充血﹑水腫，表面有纖維素粘附，滑 張充血，間質纖維組織增生。參考文獻標準[9]對滑膜
A. 正常對照組 B. 模型組 C. 秋水仙堿組 D. 虎杖 - 桂枝低劑量組 E. 虎杖 - 桂枝中劑量組 F. 虎杖 - 桂枝高劑量組
圖 1 大鼠關節滑膜組織病理圖（200×）的病理染色結果進行判斷，模型組滑膜襯里增生、血 （P＜0.05，P＜0.01）；虎杖 - 桂枝高劑量組在改善滑管充血、纖維素沉積、滑膜組織內炎癥細胞浸潤情況 膜襯里增生方面效果明顯，與模型組比較，差異有統和總積分值均明顯增加，與正常對照組比較，差異有 計學意義（P＜0.01）；虎杖 - 桂枝低、中劑量組在改統計學意義（P＜0.01）；虎杖 - 桂枝低、中、高劑量 善纖維素沉積方面效果明顯，與模型組比較，差異有組血管充血、滑膜組織內炎癥細胞浸潤和總積分值均 統計學意義（P＜0.05）。見表 3。
有顯著降低， 與模型組比較， 差異有統計學意義
表 3 各組對滑膜組織的影響（x ± s，n=8）