葡萄糖氧化發酵培養基(O/F)
成份:
蛋白胨 2.7克 氯化鈉 5.0克
0.2%溴麝香酚蘭 0.03克 瓊脂 3克
KH2PO4 0.3克 葡萄糖 10.0克
水 1000毫升
制法:以上成份除糖外,溶解調PH7.0,10磅高壓滅菌20分鐘后備用.
方法:挑取少量培養物接種兩管,其中一管接種后加液體石臘不少于1厘米厚,兩管同時35℃,培養過夜,
觀察顏色的變化,若無顏色變化,需繼續觀察七天,每日觀察刺層型別.
用途:適用于微球菌科和非發酵菌的鑒定.
麥康凱培養基
成份:
蛋白胨 20克 氯化鈉 5克
乳糖 10克 瓊脂 20克
H2O 1000毫升 1%中性紅溶液 3--4毫升
1%結晶紫 0.1毫升 PH7.4
除中性紅臨時用時加入外,其余均高壓滅菌備用.
鄰硝基酚半乳糖甙(ONPG)酶試驗
緩沖液:
Na2H2PO4 6.9克 溶于40DW中,用5NNOH調PH7.0,再加水到50毫升,冰箱保存.用前若有結晶可稍加溫,溶解后再用.
ONPG液:
稱取ONPG(鄰硝基酚--B--D半乳糖苷)80毫克,溶于15毫升D.W中,再加上緩沖液5毫升,放入冰箱中保存.此液不穩定,如出現黃色即不能用.
鑒別:
腦膜炎球菌和乳糖球菌及沙門氏菌屬與枸櫞酸菌屬及亞利桑那氏菌屬.
腦膜炎球菌和沙門氏菌屬為陽性.
乳球菌,枸櫞酸菌屬和亞利桑那菌屬為陽性.
半固體培養基
成份:
牛肉膏 3克 蛋白胨 10克
氯化鈉 5克 瓊脂 2.5--4克
水 1000毫升
校正PH7.4,15磅高壓15分鐘.傾注平板,厚度約4mm,冷藏備用.
氨基酸脫羥試驗培養基
成份:
L-氨基酸 0.5克 蛋白胨 0.5克
牛肉膏 0.5克 葡萄糖 0.05克
吡多醛 0.5克 水 100毫升
2%溴甲酚紫乙醇液 0.5毫升 2%甲酚紅 0.25毫升
制法:除指示劑及氨基酸外,溶解,PH6.0,然后加入氨基酸(必要時重新調PH)及指示劑,混勻分裝1毫升/管加10毫米厚石蠟油,高壓10--15磅10--15分鐘滅菌備用.
注意:
1 使用DL型AA時量加倍.
2 最好同時接種空白管(即不含有AA的同樣培養基)作對照.
3 培養基超過24小時可出現假陽性.
葡萄糖酸鹽培養基
成份:
蛋白胨 1.5克 酵母浸液 1克
K2HPO4 1克 葡萄糖酸鉀 40克
DW 1000毫升
溶解過濾分裝,高壓10磅15分鐘.
結果:加班氏試劑,加熱觀察結果.
黃-橙色為陽性. 無顏色變化為陰性.
阿拉伯糖(單糖)液體培養基
成份:
蛋白胨 1克 氯化鈉 0.5克
DW 100毫升(調PH7.6)
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.1毫升
阿拉伯糖 1克
菌種保存培養基
成份:
瓊脂 10克 DW 1000毫升
浸10分鐘加熱溶解后,再加
牛肉膏 5克 蛋白胨 10克
氯化鈉 3克 Na2HPO4.12H2O 2克
本培養基出自上海進出口商品檢驗局之處方,其最大優點為:細菌保存4年后,其形態菌屬特點,生化反應,血清學試驗等無變化.
厭氧培養基(GAM肉湯)
成份:
大豆胨 3克 口胨 10克
消化血清粉 13.5克 酵母浸膏 5克
牛肉膏 2.2克 牛肝膏(粉) 1.2克
葡萄糖 3克 KH2PO4 2.5克
可溶性淀粉 5克 L-半胱氨酸鹽 0.3克
硫乙醇酸鈉 0.3克 肉湯(牛心湯) 1000毫升
調PH7.2--7.4,10磅高壓滅菌15分.
用途:用于厭氧菌培養,是一般培養基的基礎,此培養基營養最豐富,用時無需加血,可用于各類厭氧菌
增菌用.
GMA瓊脂
成份:
蛋白胨 10克 大豆胨 3克
口胨 10克 消化血清粉 13.5克
酵母浸液 5克 牛肉膏 2.2克
牛肝膏 1.2克 葡萄糖 3克
KH2PO4 2.5克 氯化鈉 3克
可溶性淀粉 5克 L-半胱胺酸鹽酸鹽 0.3克
硫乙醇酸鈉 0.3克 瓊脂 1.5克
DW 1000毫升
調PH7.2--7.4,10分鐘高壓滅菌.
注意:1可溶性淀粉加熱易成糊狀凝塊,最好先用水少許將淀粉混勻,再加沸水使成糊狀,備用.
2此培養基營養豐富,無需加促進物質.
用途:用于分離培養厭氧菌.
硫乙醇酸鹽半固體瓊脂
成份: L-半胱氨酸 0.25克 葡萄糖 6克
胰蛋白胨 17克 大豆胨 3克
硫乙醇酸鈉 0.1克 氯化鈉 2.5克
亞硫酸鈉 0.1克 瓊脂 0.7克
DW 1000毫升
調PH7.6,11磅高壓15分鐘.
附:V—KL添加劑:
液體培養基0.1ug/毫升或0.1單位/毫升.固體培養基最終濃度10ug/毫升,冷卻后再加VitKL.
淋球菌培養基:
基礎瓊脂 3.4克 無菌抗凝羊血 10毫升
20%葡萄糖溶液 1毫升 萬古霉素 0.2毫升
多粘菌素B 0.0375毫升 水 90毫升
用法:
1取基礎瓊脂浸泡于水中,加熱煮沸溶解,121℃高壓滅菌20分鐘.
2加入羊血和葡萄糖,于90℃水浴中加熱,不時搖動使成咖啡色.
3冷卻至60℃,加入萬古霉素和多粘菌素B溶液,搖勻倒入平板,凝固備用.
醋酸鉛試紙培養基(測H2S)
成份: 蛋白胨 10克 胱氨酸 0.1克
硫酸鈉 0.1克 水 1000毫升
PH7.0-7.4 ,115℃高壓滅菌20分鐘.
濾紙剪成0.5-1CM寬,用5%-10%的醋酸鉛浸透,烘干,置平皿備用.
厭氧培養基
1 液體培養基
多價蛋白胨 20% 胰蛋白胨 1%
酵母浸出汁 0.5% 氯化鈉 0.5%
牛肉膏 5% 半胱胺酸 0.04%
氯化血紅素 0.5% 溶劑(牛肉浸出液)溶解調PH7.4
2固體培養基: 加瓊脂粉2.25%作血平板.
LISTER(100毫升)
液體用:
蛋白胨 2% 牛肉膏 5%
氯化鈉 5% 酵母浸 0.5%
牛心浸液作溶劑
瓊脂粉 0.8%
調PH7.4,每瓶25-30毫升分裝.
固體用:同上,加溫后加右旋糖苷20毫升或60℃左右加入明膠15%.
指示劑
1 NaOH 溶液: 0.1N NaOH 6毫升 DW 1000毫升
2 0.015%美蘭溶液:0.5%美蘭 3毫升 DW 1000毫升
3 6%葡萄糖溶液: 葡萄糖 6克 DW 1000毫升
以上1、2、3種溶液等量混合即成.
指示劑
硼酸二鈉(10H2O) 2.5克 硫乙醇酸鈉 2.4克
美蘭 25毫升 DW 650毫升
郭氏培養基
成份: 牛心浸液 10毫升 葡萄糖 1克
酚紅(0.4%) 1.3毫升 1%乙酸鉈 2毫升
調PH8.2-8.3 108℃20分鐘.
分裝時加血清或血漿(滅活)20毫升, 0.1%美蘭適量.
鞭毛染色法
玻片處理:將玻片用洗衣粉煮沸10分鐘,水洗,再用清潔液浸泡,加溫10分鐘,水洗,再放入95%酒精脫脂,同時取出涼干,可制成涂片.
染色液的配制:
20%的鞣酸溶液(加溫溶解) 2毫升
鉀明礬飽和液 2毫升
石碳酸飽和液 5毫升
10%堿性復紅無水乙醇溶液 1.5毫升
將上述各液混合后放置2-3日,過濾后備用,此液使用不得超大型過5周.
染色步驟:
將細菌接種在瓊脂平板上,培養8-18小時,(35-37℃),用無水乙醇浸泡過的而且干燥的新玻片加一滴無菌DW,用接種環挑取菌落,置DW液面上,然后自然干燥.滴加染色液染1-2分鐘,水洗干后鏡檢.
結果:鞭毛染成紅色.