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  • 發布時間:2021-04-26 10:20 原文鏈接: 臨床微生物培養基手冊(二)

    肉渣培養基
    成份: 牛肉渣             牛肉浸液(牛肉膏)
    制法:將做牛肉浸液的牛肉渣,裝入試管,高約3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏湯(PH7.6)約5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高約0.5厘米(不加也可),121℃高壓滅菌20-30分鐘后保存于冰箱內備用 。
    用途:用于厭氧菌培養。
    注意:如無肉渣也可用牛、羊血等代替,將血塊先放入水內煮沸,取出成小塊,血塊在加熱后搖勻成碎顆粒狀。

    單糖發酵管培養基(半固體)

    成份: PH7.6-7.8蛋白胨水     1000毫升(0.3克/100毫升)
           1.2%酚紅液          0.4毫升
           瓊脂                  0.4 - 0.5克
           10%糖或醇            10毫升
    制備:把蛋白胨水,瓊脂加熱溶解,然后加1.2%酚紅液0.4毫升,10%糖10毫升,混勻,分裝試管,每管約2-3毫升,經115℃高壓滅菌20分鐘后,分置于試管架上,貼上各類糖或醇類標簽備用。
    質控標準:細菌發酵糖類或醇而產生酸,能使培養基PH改變,指示劑由紅變黃色,如因發酵產生氣體則  
              半固體內產生氣泡,如有動力則半固體由清亮變混濁。

    明膠培養基
    成份:肉浸液        1000毫升(牛肉浸膏5克)
          明膠          12克
    制法:
       100毫升肉浸液中,加入明膠12克,隔水加熱煮化,校正PH7.2,分裝小號試管,用阿諾氏間歇滅菌80℃30分鐘,連續3日,或者108℃高壓20分鐘,冷卻,貯存備用。

    堿性蛋白胨水
    成份:
       蛋白胨      20克             氯化鈉      5克
       硝酸鉀       0.1克          結晶碳酸鈉(NaclCO3.12H2O)  0.2克
       水          1000毫升
                                          



    制法:將蛋白胨,Nacl,硝酸鉀,結晶碳酸鈉稱好,溶于1000DW中,校正PH8.4分裝試管,121℃高壓
          滅菌15分鐘后備用 。
    用途:用于霍亂弧菌培養。
                                          
    葡萄糖蛋白胨水(M。V用)
    成份:蛋白胨        5克             葡萄糖         5克
          K2HPO4       5克              水          1000毫升
    制法:將上述稱好溶解分裝試管,調PH7.4高壓滅菌115℃ 滅菌20分鐘 ,或者葡萄糖加熱煮沸后再倒試管
    標準:滅菌試驗合格。
          接種大腸桿菌VP陰性,M陽性;接種產氣桿菌VP陽性,M陰性。
    用途:作鑒別腸道桿菌用。

    枸椽酸鹽培養基
    成份:磷酸二氫銨    0.1克           硫酸鎂      0.02克
          磷酸氫二鉀    0.1克           枸椽酸鈉    0.23--0.5克(0.36)
          氯化鈉        0.5克           瓊脂        1.5克
          0.5%溴麝香草酚蘭2毫升 (調PH6.8再加)
    制法:將上述稱好,放入水中煮沸溶解,調PH6.8,然后分裝中號試管,高壓滅菌,趁熱倒呈斜面,凝固
          后備用。
    標準:1滅菌試驗合格,培養基呈果綠色適宜。
          2接種大腸桿菌,培養基上不生長,也不變色。
          3接種產氣桿菌,培養基呈深蘭色。
    用途:作鑒別大腸桿菌用。

    雙糖鐵培養基
    成份:
        下層:蛋白胨    1克            氯化鈉      0.5克    
              葡萄糖    0.2克         瓊脂       0.3-0.5克
              水       100毫升
           將上述物質混勻調PH7.6后加1.2%酚紅0.4毫升
        上層:蛋白胨     1克         氯化鈉      0.5克
              乳糖       1克         硫代硫酸鈉   0.03克
              硫酸亞鐵  0.02克      瓊脂         1克
              水       100毫升
    制法: 1將下層配好,分裝中號試管(1毫升),塞好包扎,15磅高壓滅菌半小時,使凝固后備用。
           2制上層時,先將蛋白胨水制好,加入硫酸亞鐵,硫代硫酸鈉,加熱溶解PH8.1,再加入酚紅分瓶,(每瓶300毫升,稱取瓊脂包扎滅菌,趁熱加入乳糖隔水煮沸30分鐘或112℃消毒15分鐘)。
           3取已制的下層管,每管用無菌法倒入上層液約1。5毫升,邊斜放置使成斜面,凝固后備用。
    標準:無菌試驗合格,接種大腸桿菌下層產酸產氣,上層產酸。




    尿素培養基
    成份:蛋白胨       0.1克         氯化鈉      0.5克
          磷酸二氫鉀   0.2克         尿素        0.2克(或10%2毫升)
          葡萄糖      0.01克(或10%葡萄糖0.1毫升)
           H2O       100毫升         酚紅(0.2%)    0.4毫升


    制法:1除葡萄糖,尿素外把其它藥品稱好放入水中煮沸,使溶解,調PH7.2過濾,15磅高壓滅菌15分鐘.
          2配制尿素(滅菌)液:每100毫升基液內加2毫升.
          3配制10%葡萄糖(滅菌)每100毫升加0.1毫升.
          4分裝小試管待用.
    標準:
         1滅菌試驗合格.
         2接種變形桿菌24小時呈紅色.
    用途:鑒定變形桿菌用.




    膽鹽中性紅瓊脂
    成份:蛋白胨瓊脂PH7.2-7.4       5000毫升
          膽  鹽                        2.5克
          乳糖                          5.0克
          對氨基苯甲酸                  25毫克
          1%中性紅溶液                 25毫升
    制法:
        將膽鹽,對氨基苯甲酸,乳糖趁熱加入已滅菌之蛋白胨瓊脂中,待冷至50-60℃時,加入1%中性紅液2.5毫升,混合后即傾注平皿,凝固待用.
    *:1%中性紅:1克中性紅加酒精60毫升,加水40毫升



    丙二酸鹽培養基(縮蘋果酸鈉)
    成份:丙二酸鈉      0.3克        酵母浸膏        0.1克
          Nacl          0.2克        硫酸銨          0.2克
          K2HPO4      0.06克       KH2PO4         0.04克
          水            100毫升
          PH6.8,高壓滅菌備用.
          0.2%溴麝香酚蘭乙醇  1.25毫升
    制法:與枸椽酸鹽利用試驗相類似,是測定細菌能否利用丙二酸鹽與碳源.無機銨鹽為氨源而生長,生長者使培養基變成堿呈蘭色.
    鑒定:   克氏桿菌     (+)            赫夫尼亞     (+)
             沙門氏菌      (—)          痢疾桿菌      (—)


    苯丙氨酸培養基
    成份:酵母浸液   1.5克          DL--苯丙氨酸     1克
          磷酸氫二鈉(無水)0.5克(或L-苯丙氨酸     0.5克)
          氯化鈉     2.5克               瓊脂           6克
          水         500毫升               PH7.4
    制法:1  將上述成份加熱溶解,分裝于12*125mm口徑的試管中,每管約4毫升.
          2  高壓滅菌15磅10分鐘,趁熱使試管斜置凝固后備用.
          3  接種時劃斜面.
    用途:鑒定沙門氏菌用.苯丙氨酸脫氨酶試驗沙門氏菌陰性.



    雙抗培養基
    成份:
         蛋白胨      10克            牛肉膏      5克      
         氯化鈉      5克             無水亞硫酸鈉  3克
         檸檬酸鈉   10克             蔗糖       10克
         瓊脂粉     20克             水         1000毫升
    制法:
        1將上物稱好,加熱溶于水中.
        2調PH8.2—8.4
        3 分裝高壓滅菌后備用.
        傾注平板前先加熱溶解瓊脂等冷至50℃左右,按無菌操作加入多、慶抗菌素充分搖勻, 傾注平板,凝固后備用.
        (慶大霉素:150u/毫升,多粘菌素:1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培養基內,此相當于慶大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升)


    O2培養基
    保存液:(文—臘氏液)
    A液:硼酸    12.405克           KCL    14.912克
          水      1000毫升    
       取A液250毫升 0.8%NAOH    133.5毫升
         NACL       20克               水       1000毫升
         分裝高壓滅菌.




    硝酸鹽胨水
    成份:
         蛋白胨     1克
         硝酸鉀(無NO2)    0.1克  
         H2O        100毫升
          PH7.4,高壓滅菌分裝備用.

    (如無硝酸鉀也可用硝酸鈉0.02克,NACL0.05克,H2O100毫升)
    用途:硝酸鹽還原試驗用.
    原理:測定細菌能否還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,后者在酸性條件下與a—萘胺和對氨基苯磺酸發生重氮反應,生成紅色的1-萘-4偶氮苯對磺酸.
    制法:試劑甲液A對氨基苯磺酸0.8克溶于5N的醋酸100毫升.
        B:乙液a-萘酚0.5克溶于5N的醋酸100毫升中
        將細菌接種于硝酸鹽水中37℃培養24--96小時,加入甲液0.1毫升,再加入乙液數滴,立即呈現紅或紫色為陽性


      king氏培養基(能促進綠膿菌綠色素產生)
    成分:
          蛋白胨         2克                   K2SO4        1克
          甘油           1克                   MGCL2       0.14克  
          瓊脂           1.5克                  H2O         100毫升
                   KING氏培養基(能促進綠膿菌熒光色產生)
    成分:
          蛋白胨         2克                   甘油          1克
          K2SO4         0.15克                 MGSO4       4.7克           H2O      0.15克
          瓊脂           1.5克                  H2O          100毫升
          調PH7.2       15磅20分鐘消毒后使成斜面備用.

                   七葉苷水解試驗
    原理:
         糞鏈球菌能分解七葉苷(Escalin)其代謝產物與鐵離子結合產生黑色沉淀,使培養基變黑.
    方法:
         將菌種接種在七葉苷或瓊脂上37℃18小時,觀察結果,培養基變黑色,其他鏈球菌能生長但不變黑色,肺炎鏈球菌不長.
    成分:  
         七葉苷       0.1克                     胰胨           1.5克
         枸櫞酸鐵     0.2克                     瓊脂           2.0克(0.5克/50毫升)
         膽汁         2.5毫升                     H2O            100毫升
         PH7.0分裝小試管內高壓滅菌后備用(10磅20分鐘)
         七葉苷又名桑樹皮甙,七葉靈,Aesclin  Escnlim  Bicolorin等.為白色針狀結晶.水溶液蘭色熒光.)

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