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  • 發布時間:2021-11-25 19:00 原文鏈接: 臨床微生物學標準菌株的管理

    標準菌株的管理

    (1)供應商的選擇  

    選擇有資質的標準菌株合格供應商,每批標準菌株必須附帶有供應商的合格證或檢測報告或說明書,來證明所采購的標準菌株是合格的。

    (2)標準菌株和驗收  

    實驗室收到標準菌株,首先應進行符合性感官檢查,記錄菌株號和標準菌株來源途徑信息,確保溯源性清楚。同時還應記錄標準菌株名稱和數量、生產日期、接收日期和有無破損等情況。

    (3)凍干標準菌株的復蘇  

    購回的標準菌株一般為凍干粉劑,依照隨產品附有的菌種復活方法,在相應的生物安全水平下打開包裝,選擇合適的培養基和培養條件(根據生產商說明或有關技術通則)進行復活。凍干菌株的傳代次數不得超過5代。

    (4)菌株性能的確認

    ①純度檢查(觀察菌落形態):取復活后的培養物,在相應的鑒別平板或非選擇平板上劃線分離,培養出單菌落,觀察菌落形態是否符合該菌株要求,同一平板上的單菌落大小、形狀、顏色、質地和光澤是否相似,對于出現兩種以上形態的菌株,應再分別挑取單菌落劃線,檢測是否出現相同特征。

    ②細胞形態:取劃線平板上的單菌落,革蘭染色反應應符合要求,且呈現一致性。

    ③必要時進行生化鑒定

    ④污染處理:如發現菌株有污染,挑選目標菌培養成功后,將培養物滅菌銷毀(121℃,30分鐘)。

    (5)標準菌株的保存  

    保存菌種的方法應根據菌種的類型和保存目的進行選擇,一般包括以下幾種方法:

    ①一般保存方法:用高層瓊脂保存,使細菌處于代謝緩慢狀態,并按照各種細菌生長的情況作定期移種。此方法是最簡單的保存方法,不需要特殊設備,并可隨時提供使用,最長可保存1年。但細菌經多次移種后,性狀可能發生變異。

    ②低溫冷凍保存方法:取對數生長期的細菌混懸于小牛血清或無菌脫纖維羊血0.5~1.0ml中,容器中加入無菌玻璃珠數枚,存于-40℃低溫冰箱中保存。需要時用無菌鑷子取出一枚玻璃珠置培養基中,即可獲得新鮮菌種。大部分細菌用此方法可保存6~12個月,甚至更長時間。應注意:標準菌株保存管一經融化使用后,不得再次凍存。

    ③冷凍干燥法:是菌種保存最佳方法,可以免去細菌因頻繁傳代而造成的菌種污染、變異和死亡。此法需冷凍干燥設備,操作較費時,但適用于需要長期保存的菌種。

    菌株保存的注意事項:①不能用含有可發酵性糖的培養基保存菌種;②不可以使用選擇性培養基,不能從藥敏試驗平板培養基上留取菌株;③不得使培養菌干枯,所有試管要保持良好的密封性;④對溫度變化敏感的細菌,如淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌,不可貯存于冰箱,但可用快速冷凍干燥法長期保存;⑤作為抗菌藥物敏感試驗用的標準菌株,由保存狀態取出后,不能連續使用1周以上,應定期傳代,一般不超過6次,必要時進行更換。

    (6)標準菌株的期間核查  

    標準菌株的期間核查頻率為每半年一次;工作菌株期間核查的方法同菌株的性能確認方法;同時建立標準菌株期間核查記錄。

    (7)標準菌株的廢棄  

    標準菌株如已老化、退化、或變異、污染等,經確認試驗不符合的或該菌種已無使用的應及時銷毀。廢棄的標準菌株由部門負責人批準,使用人員放入121℃高壓鍋內,高壓滅菌45分鐘后作為廢棄物處理。

    (8)記錄  

    實驗室應記錄標準菌株的配制、復活、傳代和確認等工作內容并定期交文檔管理員存檔。


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