一、布魯氏菌與布魯氏菌病
布魯氏菌(Brucella)是人獸共患的布魯氏菌病病原體,牛、羊、豬等動物最易感染。我國流行的主要是羊、牛(馬耳他)、豬三種布魯氏菌,其中以羊布魯氏菌病最為多見。
該主要感染懷孕動物,侵入生殖器官和網狀內皮系統,并感染胚胎和胎兒,多導致胎兒死亡并流產;公畜主要表現為睪丸炎。人患病主要是由畜傳染,人與人之間傳染機會極少,感染途徑主要是通過皮膚、消化道、呼吸道、眼結膜和生殖器官。人感染后潛伏期2~3周,由于本菌具有莢膜,能抵抗吞噬細胞的吞噬,并能在該細胞內增殖,反復出現菌血癥,病人出現發熱、無力等癥狀,且呈波浪式發熱,故在臨床上稱為波浪熱。
人類接觸帶菌動物或食用病畜及其乳制品,均可被感染。布魯氏菌病最危險之點是患畜幾乎不表現癥狀,但能通過分泌物和排泄物(乳、精子、陰道分泌物、糞、尿)不斷向外排菌,待別是隨流產胎兒、胎衣和羊水排出大量病原菌,成為最危險的傳染源。本菌在自然界中抵抗力較強,在病畜臟器和分泌物中,一般能存活4個月左右,在食品中約能生存2個月。在水、土、糞、尿中存活3個月,在皮毛上存活1~4個月,在凍肉中存活2~7周,在乳中存活10天至1年。對低溫的抵抗力也強,對熱和消毒劑抵抗力弱。對鏈霉素、氯霉素和四環素等均敏感。
二、生物學特性
(一)形態染色特性
布魯氏菌初分離時為微小球桿菌,繼代后,牛和豬布魯氏菌可逐漸變為桿狀,羊布魯氏菌仍為小球桿狀。平均大小為0.6~1.5μm ×0.5~0.7μm。革蘭氏染色陰性。不形成芽孢,無鞭毛,無動力。常單個存在。光滑型菌有莢膜。可被所有堿性染料著色,不呈兩極濃染。柯氏染色法(沙黃與孔雀綠對染)染色,本菌為鮮紅色,其它雜菌被染成綠色。
(二)培養特性
n專性需氧,但許多菌株初次分離時需5% ~10%的CO2環境。適宜溫度為35~38℃,適宜pH為6.6~7.4。布魯氏菌的培養特點是生長緩慢,尤其是新分離株初次分離時在48h前罕見菌落形成,往往需要5~10d甚至20~30d。傳代適應后48h可見生長。
n對營養要求嚴格,需某些氨基酸、血清、或組織浸液。血清葡萄糖肉湯和血清葡萄糖瓊脂可支持所有種和大多數菌株生長。在肉肝湯中一般需2~3d才可見生長。肉湯輕微渾濁,無菌膜。1周后產生灰白色粘稠沉淀物。老齡培養物中有時可見菌環。
n在血清肝湯瓊脂上2~3d 后形成濕潤、閃光、無色、圓形、表面隆起、邊緣整齊的小菌落。在血液肝湯瓊脂上菌落灰白,不溶血。在高層血清瓊脂培養3~6d后,牛型及綿羊型于瓊脂表面0.5cm處呈帶狀生長。而在馬鈴薯斜面上本菌生長良好,2~3d后長出微棕黃色菌苔,色素溶于基質。
(三)特性
多數菌株可分解葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等,但分解能力低,產酸少,很難檢測。本菌不液化明膠;不產生靛基質;不凝固牛乳;能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽;接觸酶陽性;MR試驗和V-P試驗陰性;H2S試驗不定。
(四)血清學特性
?本菌抗原結構非常復雜,就目前所知,布魯氏菌有表面抗原(A、M、R)、亞表面抗原和深部抗原3類。
n1. A、M抗原 光滑型菌株的表面抗原主要是A(流產型)和M(馬耳他型)抗原,為細胞壁脂多糖的大分子復合物,既是這些細菌的凝集原,也是種和型鑒定的重要依據。流產布魯氏菌A﹕M為20﹕1,馬耳他布魯氏菌為1﹕20,豬布魯氏菌為4﹕1。
n2. R抗原 非光滑型菌株除A、M抗原外,均還具有R抗原,為細胞壁上低蛋白含量的脂多糖復合物。絕大多數非光滑型菌株的R抗原是相同的,其抗血清可與羊布魯氏菌和犬布魯氏菌發生凝集,而不與光滑型布魯氏菌凝集。
三、檢驗
一) 檢驗程序
二) 細菌的分離培養與鑒定 首先要注意安全,防止人員感染和環境污染,其次要特別注意滿足布魯氏菌的營養要求。
1. 細菌的分離培養:SDA(血清葡萄糖瓊脂),對污染樣品則接種在選擇培養基(加有抗生素的SDA)上。也可將檢樣接種于含2%(W/V)檸檬酸鈉和抗生素的SDB中,經37℃培養2~3d(必要時補充5~10%的CO2)后再于SDA上分離培養約6d,直到出現可見菌落。
2. 布魯氏菌的鑒定分型:在必要時進行布魯氏菌的鑒定分型。 常規方法有: CO2需求的檢查,H2S產生量的測定,染料抑菌試驗, A、M、R血清凝集試驗, Tb噬菌體裂解試驗。
三) 血清學檢驗
用血清學試驗診斷人、畜布魯氏菌病仍是當前主要手段。常用的方法有10多種,其中用于人布病診斷的主要有試管凝集試驗、二巰基乙醇試管凝集試驗、抗球蛋白試驗和補體結合反應,用于動物診斷的主要方法是試管凝集試驗、平板凝集試驗、虎紅平板凝集試驗和瓊脂擴散試驗等。