三、單試劑和雙試劑方式
反應過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。目前的生化分析儀大多可用雙試劑方式分析，其優點是：①可提高試劑的穩定性，多數雙試劑混合成單一工作試劑時，其穩定時間縮短；②能設置兩點終點法，來消除來自樣品本身的光吸收干擾；③在某些項目檢測時能消除非特異性化學反應的干擾。如血清ALT測定，血清中的內源性丙酮酸及其它酮酸也可與試劑中的指示酶（乳酸脫氫酶）起反應，使結果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應之后再加入含有α-酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應消耗的NAD＋能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應的影響。
四、測定過程的自動監測
各種自動生化分析儀或多或少都具有對測定過程進行各種監測的功能，以便在沒有人"監督"化學反應的情況下提高檢測的準確性。高檔分析儀的監測功能更強。
1．試劑空白監測 每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示著該試劑的變質：如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因酚被氧化為醌而變為紅色；堿性磷酸酶、γ－谷氨酰轉移酶、淀粉酶等檢測試劑會因基質分解出硝基酚或硝基苯胺而變黃；有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反應檢測項目，其試劑在放置過程中空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降等。
試劑空白的測定方法有兩種：①每瓶試劑在使用前通過對試劑空白校準來確定試劑空白吸光度，這種方式適用于先取樣品后加試劑的分析儀。②每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度，適用于先加試劑后取樣品的分析儀。
2．試劑空白變化速率監測 一些酶試劑在反應溫度下不穩定，其空白吸光度可隨著時間逐漸發生變化，這種變化的主要原因與工具酶或輔酶的純度有關，且因試劑的組成和生產廠家的不同而不同。這種變化會影響測定結果的準確性，一般使結果偏高。如果設置此項監測，分析儀在結果計算時會自動減去試劑空白變化速率。在以監測NAD（P）H減少為指示反應的酶活性測定中，空白速率可監測并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降；在色素原為底物的酶活性測定中，空白速率可監測并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關空白速率監測在膽紅素對堿性苦味酸速率法測定肌酐負干擾消除中的作用，已如前述。
3．樣品信息監測 由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定結果產生非化學反應的干擾。根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質和程度，一般是測定樣品在600nm／570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然后在結果計算時自動減去這部分干擾，這將有利于提高分析結果的可靠性。
4．結果可靠性監測
（1）終點監測：終點法測定要判斷所選的測光點是否到達終點或平衡點。一些分析儀在所選終點后再選一個測光點，比較這兩點吸光度的差異來判斷反應是否到達終點。
（2）線性期監測：連續監測法選擇時間－吸光度反應曲線上的線性期來計算酶活性或被測物濃度，因此儀器要確定此連續監測期是否呈線性。其監測方法為①將連續監測到的各吸光度值進行線性回歸，計算出各點的方差，根據方差值的大小來判斷是否呈線性；②取連續監測期開始若干點的變化速率與連續監測期最后若干點的變化速率進行比較，來判斷是否為線性期。
5．底物消耗的監測 在連續監測法測定酶活性時，如果在監測期內吸光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監測期的吸光度將偏離線性，使測定結果不可靠。此時不打印結果或打印結果同時也打印出底物耗盡提示，該樣品應稀釋一定的倍數重新測定。此監測對于采用負反應分析酶活性的方法甚為重要。見圖7-9
6．方法線性范圍監測 每種待測物分析都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，分析儀將顯示測定結果超過線性范圍的提示，多數分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。
四、分析參數設置舉例
以肌酸激酶的某通用試劑盒在某分析儀上使用為例，設置其反應程序中的主要參數。
1．某生化分析儀有關參數的設置范圍 樣品量2－35?l，第一試劑量20－270?l，第二試劑量20－270?l，總反應容量180－350?，吸光度監測周期18s，總反應時間10min，各試劑可加入時間：1.5min，4.5min，9.5min。
2．肌酸激酶試劑盒通用參數 樣品量50?l，第一試劑1000?l，37℃保溫5min，加第二試劑500?l，延滯時間2min在340nm讀第一點吸光度，連續監測2min。
3．根據以上條件進行參數設置
（1）按比例減少樣品量和各試劑量：使反應液總容量在分析儀180－350?l范圍內。選擇樣品量為10?l，第一試劑200?l，第二試劑100?l，這時反應液總容量是310?l。或者選擇樣品量為8?l，第一試劑160?l，第二試劑80?l，這時反應液總容量是248?l。
（2）確定第二試劑加入時間：根據通用參數，應選擇4.5min為第二試劑加入點。
（3）確定各個吸光度選擇點：由于第二試劑加入時間4.5min，換算成監測周期為第16，17點之間，加上2min延滯時間，則在第24監測點為第一點吸光度，并連續選擇24-31監測點。
（4）計算K值：根據樣品量10?l，第一試劑200?l，第二試劑100?l，代入計算公式
則K = = = 4984
也可以采用肌酸激酶的校準品，執行校準程序來得到校準K值。
4．對新設置的反應參數進行試運行 在開始運行時，分析儀會對各反應參數之間的邏輯合法性進行檢測，如果反應參數中出現邏輯性錯誤，則分析儀會顯示錯誤信息并停機，這時可以根據提示信息對反應參數進行修改。
第四節 自動生化分析儀的工作過程和操作方法
一、工作過程
在測定過程中所有機械步驟均由微處理器根據已設定的程序（procedure）進行工作。
1．取樣加試劑和混勻 樣品盤轉動，使樣品進入待測位置，樣品針定量吸取樣品加入一反應杯；反應盤旋轉；試劑轉盤轉動使所需試劑瓶進入試劑吸取位置，試劑針定量吸取試劑加入反應杯；攪拌機構將反應杯內液體進行攪拌混勻。此后，便按遞進原理對下一樣品進行采樣、加試劑等同樣操作。
2．保溫反應和吸光度檢測 反應盤旋轉，反應杯內液體在恒溫條件下進行化學反應，當該反應杯通過吸光度檢測窗口時即被檢測得到一個吸光度值；再按規定的間隔時間檢測反應過程中的吸光度值直至總反應結束。總反應時間一般為10min，如果18s為檢測吸光度的間隔時間（interval time），則10min得到34個吸光度值，若15s為間隔時間，則得到40個吸光度值。
分析儀能顯示或/和打印反應全過程的時間－吸光度曲線，從這條曲線上，能觀察和計算化學反應的速度、時間，以及反應呈線性段的時間，從而可為確定分析方法類型、參數設置等提供依據。
3．計算并顯示或打印結果 分析儀根據各測光點讀數對某一檢測項目進行結果計算，并顯示或打印出每個項目的報告，也可按標本顯示或打印出全部項目的累積。即待某樣品指定的項目測試完畢，便顯示或打印檢測結果。