固定柱床層析是一種多功能的分離技術,常用于生物醫藥的分離中。
無論是在保證純化過程的穩定性還是保證最終產物的安全性上,填充柱的制備和質量認證都是極為重要的步驟。
即使柱效檢測不能作為單一參數對后期的純度和回收率進行預測,至少在啟動純化工藝前可作為一種快速途徑對層析柱和設備性能進行檢測。所以需要檢測柱效。
1,系統準備
對系統和管道進行潤洗準備
清除在包裝、儲存或運輸過程中累積在管道和分流系統中的空氣
將層析柱置于1.5 柱體積以上的洗脫液中進行平衡。若柱平衡在鹽溶液中進行,則需要保證出口的電導和入口的電導一致。平衡時的液流方向需與測試時一致。測試方向既可向上流也可向下流。
2,運行脈沖柱效檢測
將提前準備好的一定體積的樣品(1%柱體積)加載于柱上,上樣最好采用樣品環,超級容量杯或樣品泵。
3,通過測定峰寬和對稱性評價
相對峰寬通常用一定數量的理論塔板(N),
一個理論塔板的等價高度(HETP)
顆粒半徑 (d/P)
或更常用折合了的塔板高度(h)來進行描述:
h=HETP/d/P 對稱性As
對稱因子As 描述了與理想高斯峰形狀的偏差,通過對10%
峰高處的峰寬進行計算得到:
As=b/a