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  • 發布時間:2021-11-22 09:46 原文鏈接: 為什么質粒酵母電轉化不進去

    釀酒酵母的電轉感受態制備方法和電轉化方法
    (1)接種工業酒精酵母至30 mL液體YEPD培養基,30度培養12 h;
    (2)取培養物以1%的接種量轉接到30 mL新鮮YEPD液體培養基中,30度培養8 h,
    使菌體達到同步生長狀態;
    (3)將酵母培養物置于冰上放置30 min后,6,000 r/min離心5 min收集菌體;
    (4)棄上清,加入已預冷的15 mL超純水洗滌菌體一次;
    (5)6,000 r/min離心5 min收集菌體,用15 mL 1 mol/L山梨醇重復洗滌菌體三次;
    (6)離心收集菌體,加入200μL 1 mol/L山梨醇重懸浮菌體,取200μL的菌懸液至1.5 mL
    離心管中;
    (7)在制得的菌懸液中加入20μL(≤5μg)待轉化的質粒或DNA片段,輕輕混勻后冰浴
    10 min;
    (8)將冰浴后的菌懸液轉入已預冷的電轉杯中,1,500 V電擊5 ms;
    (9)加入適量體積的1 mol/L山梨醇將電轉后的菌懸液從電轉杯中洗出,取200μL涂布
    相應的抗性平板;
    (10)30度培養3-5天挑選轉化子。

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