釀酒酵母的電轉感受態制備方法和電轉化方法
(1)接種工業酒精酵母至30 mL液體YEPD培養基,30度培養12 h;
(2)取培養物以1%的接種量轉接到30 mL新鮮YEPD液體培養基中,30度培養8 h,
使菌體達到同步生長狀態;
(3)將酵母培養物置于冰上放置30 min后,6,000 r/min離心5 min收集菌體;
(4)棄上清,加入已預冷的15 mL超純水洗滌菌體一次;
(5)6,000 r/min離心5 min收集菌體,用15 mL 1 mol/L山梨醇重復洗滌菌體三次;
(6)離心收集菌體,加入200μL 1 mol/L山梨醇重懸浮菌體,取200μL的菌懸液至1.5 mL
離心管中;
(7)在制得的菌懸液中加入20μL(≤5μg)待轉化的質粒或DNA片段,輕輕混勻后冰浴
10 min;
(8)將冰浴后的菌懸液轉入已預冷的電轉杯中,1,500 V電擊5 ms;
(9)加入適量體積的1 mol/L山梨醇將電轉后的菌懸液從電轉杯中洗出,取200μL涂布
相應的抗性平板;
(10)30度培養3-5天挑選轉化子。