4、HooK效應影響
隨著ELISA一步法的應用，一些標本中抗原含量過高，產生HooK效應。影響檢測結果，采用同步稀釋測定或使用線性范圍高的兩對半定量法可以減HooK反應的發生。
5、干擾物質的影響
有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果；常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。如RF因子可與標記二抗的FC段法結合造成假陽性，補體從C1q活化，使一抗和酶標二抗的抗體分子發生變構，Fc的C1q分子結合點暴露出來，則補體C1q可將二者連接起來造成假陽性，采用56℃30分鐘滅活補體可降低假陽性率，高濃度的AFP（如孕婦），在儲存過程中可能形成二聚體會導致本底過深影響檢測結果。
6、藥物的影響
6.1、高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測會呈陰性反應，導致乙肝兩對半少見模式的出現，如我們常遇到乙肝大三陽的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時，在孕第8、9、10月常規注射200mg乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦HBsAg的檢出；而且其所生產的生新兒也常出現HBsAg陰性，HBeAg 陽性和HBcAb陽性等少見模式、可能是乙肝免疫球蛋白屬IgG抗體能通過胎盤進入胎兒體內與胎兒血液中的HBsAg結合形成復合物；則新生兒HBsAg檢測呈陰性；用0.5M的鹽酸處理標本1小時可提高出率[2]。
6.2、為預防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1—2周內，血清中可檢出HBsAg成份，形成一過性HBsAg陽性，這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，有方法能夠把它檢出；如電化學發光法，建議接種乙肝疫苗后1個月內不應作HBsAg檢測。
總之，乙肝兩對半檢測必須排除各種影響因素的干擾才能為臨床提供正確可靠的檢測結果。