取本品10片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于乙酰螺旋霉素0.2g),加乙醇(每5mg加乙醇2ml)使乙酰螺旋霉素溶解,如為糖衣片,取本品5片,研細,加乙醇(每5mg加乙醇2ml)使溶解,用滅菌水定量稀釋制成每ml中約含1000單位的溶液,搖勻,靜置,精密量取上清液適量,照乙酰螺旋霉素項下的方法測定。