還原反應測定
氧化反應測定
| 實驗方法原理 |
ADH 反應： 乙醛 + NADPH + H+ ? 乙醇 + NAD+ 此反應是可逆的，并且可以從兩個位點檢測出來，平衡常數是 8×1012 mol/Ｌ。乙醇的生成是人們希望看到的，由此可以更為簡單地檢測這個方向的反應進程。但是也有極為不利的因素，即乙醛的毒性以及此反應速度過快。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 乙醇脫氫酶 |
| 試劑、試劑盒 | 磷酸鉀 BSA 溶液 NADH 乙醛 |
| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 0.98 ml 的實驗混合物
0.02 ml ADH（0.02 IU） 25 ℃ 時，于 340 nm 處吸收值降低。為了方便量化，經常使用 NADH 的吸收系數 ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。
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| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑： 0.1 mol/L 磷酸鉀，pH 7.5 0.1 g BSA 溶于 100 ml 0.1 mol/L 磷酸鉀溶液中，pH 7.5（BSA 溶液） 0.01 mol/L NADH（71 mg 溶于 10 ml H2O） 0.5 mol/L 乙醛，2.2 g（2.82 ml）溶于 100 ml H2O 用 BSA 溶液稀釋 ADH：按照其活性，商業購買的酶需要被稀釋，例如 0.02 IU 的 ADH 每分鐘轉化 0.02 mol NADH，相當于吸收值變化 0.126，這是一個對反應來說很方便的數值。對于 400 IU/mg 購買的 ADH，也許需要將 10 mg/ml（4000 IU/ml）的原料溶液溶于 pH 7.5、0.1 mol/L 的磷酸鉀中。然后，稀釋溶液 4000 倍（2.5 ul 溶于 10 ml BSA 溶液中），使其最終為 1 IU/ml。取出 20 ul 做酶的測定實驗。
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