乳制品中黃曲霉毒素檢測

采用標準

國標GB 5413.37-2010

方法/原理/步驟

　　1.樣品前處理方法

　　適用于乳和乳制品中黃曲霉毒素的測定。

　　⑴提取方法：

　　①乳：

　　稱取50 g(精確至0.01 g)混勻的試樣，置于50 mL具塞離心管中，在水浴中加熱到35℃～37℃。在6000轉/分鐘下離心15 min。收集全部上清液，供凈化用。

　　②發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：

　　稱取50 g(精確至0.01 g)混勻的試樣，用0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調pH值至7.4，在9500轉/分鐘下勻漿5 min，在水浴中加熱到35℃～37℃。在6000轉/分鐘下離心15 min。收集全部上清液，供凈化用。

　　③乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：

　　稱取10 g(精確至0.01 g)試樣，置于250 mL燒杯中。將50 mL已預熱到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒將其混合均勻。如果乳粉仍未完全溶解，將燒杯置于50℃的水浴中放置30 min。溶解后冷卻至20℃，移入100 mL容量瓶中，用少量的水分次洗滌燒杯，洗滌液一并移入容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后分別移至兩個50 mL離心管中，在6000轉/分鐘下離心15 min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供凈化處理用。

　　④干酪：

　　稱取經切細、過10目圓孔篩混勻的試樣5g(精確至0.01 g)，置于50 mL離心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，在9500轉/分鐘下勻漿5 min，超聲提取30 min，在6000轉/分鐘下離心15 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振搖2 min，待分層后，將下層移于50 mL燒杯中，棄去石油醚層。重復用石油醚提取2次。將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2 mL，濃縮液倒入離心管中，燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌，洗滌液一并倒入50 mL離心管中，加水稀釋至約50 mL，在6000轉/分鐘下離心5 min，上清液供凈化處理。

　　⑤奶油：

　　稱取5g(精確至0.01 g)試樣，置于50 mL燒杯中，用20 mL石油醚將其溶解并移于250 mL具塞錐形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振蕩30 min后，將全部液體移于分液漏斗中，待分層后，將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中，在旋轉蒸發儀中減壓濃縮至約5 mL，加水稀釋至約50mL，供凈化處理。

　　⑵凈化方法

　　①免疫親和柱的準備：

　　將一次性的50 mL注射器筒與親和柱上頂部相串聯，再將親和柱與固相萃取裝置連接起來。

　　②試樣的純化：

　　將上述樣品提取液移至50 mL注射器筒中，調節固相萃取裝置的真空系統，控制試樣以2mL/min～3 mL/min穩定的流速過柱。取下50 mL的注射器筒，裝上10 mL注射器筒。注射器筒內加入水，以穩定的流速洗柱，然后，抽干親和柱。脫開真空系統，在親和柱下部放入10 mL刻度試管，上部裝上另一個10 mL注射器筒，加入4 mL乙腈，洗脫待測物，洗脫液收集在刻度試管中中，洗脫時間不少于60秒。然后用氮氣緩緩地在30℃下將洗脫液蒸發至近干(如果蒸發至干，會損失待測物)，用乙腈-水溶液(1+9)稀釋至1 mL。

儀器設備

　　2. LC-MS/MS儀器條件

　　①液相色譜參數：

　　色譜柱：Phenomenex Luna PFP(2) 3μm,100?, 50×2mm

　　柱溫：28℃

　　流動相：含0.1%甲酸，甲醇/5mM乙酸銨水溶液(60:40)

　　流速：0.4 mL/min

　　進樣量：10μL

　　運行時間：3min

　　②質譜參數：

　　以下參數以API 3200為例，具體參數和檢測靈敏度視儀器不同而有差異

　　離子源參數：

　　CUR: 20 psi

　　IS: 5500 V

　　TEM: 425°C

　　GS1: 30 psi

　　GS2: 60 psi

　　Ihe: On

　　CAD: High

實驗結果和結論

　　實驗結果

　　黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1提取離子流圖如下：

　　結論

　　AB SCEIX提供的全方位解決方案可同時測定乳及乳制品中B1、B2、G1、G2和M1共5種黃曲霉毒素。

　　AB SCIEX公司提供免費下載的用于測定黃曲霉毒素的iMethod，在Cliquid軟件中安裝后可直接使用。