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  • 發布時間:2020-08-17 17:37 原文鏈接: 二氫硫辛酰胺脫氫酶的測定

    實驗方法原理


    此可逆反應可以從任一方向檢測。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以購買到的,但是利用簡單的步驟就可使其還原。硫辛酸和其氨基化合物都可作為底物,有氨基存在,此酶的活性要強 5 倍。

    實驗材料 酶樣品

    試劑、試劑盒 磷酸鉀NADDTEDL-二氫硫辛酰胺

    儀器、耗材 分光光度計

    實驗步驟

    實驗所需「試劑」具體見「其他」


    0.96 ml 實驗混合物


    0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氫硫辛酰胺 4.0 mol/L


    0.02 ml 酶樣品


    開始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液


    30℃ 時,于 340 nm 處吸收值發生變化,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


    注意事項

    其他

    試劑:


    0.1 mol/L 磷酸鉀,pH7.5


    0.1 mol/L NAD(游離酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.1 mol/L DTE(二硫赤蘚糖醇,Mr=154.2;或二硫蘇糖醇,DTT,Mr=154.2;154 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.2 mol/L DL-二氫硫辛酰胺(Mr=207.3;52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液濃度的二氫硫辛酰胺不可溶于水中,而且不可溶于酒精。存在醇脫氫酶時,例如天然的乙醇可以與 NAD 反應形成乙醛和 NADH,因此必須排除這個酶的活性,若兩者選一,底物必須溶解于丙酮溶液中)。


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  • 调性视频