二級菌種和三級菌種培養基的制備實驗

一、實驗目的

1．了解二級菌種和三級菌種培養基配制的原理；

2．掌握制作二級菌種和三級菌種培養基的關鍵技術；

3．學會固體培養基含水量的簡易測定方法。

二、實驗材料

木屑、種木、麥麩、石膏粉、糖、水、高壓鍋、750g菌種瓶或12cm×28cm×0.04cm的聚丙烯（低壓聚乙烯）折角袋、棉花、棉線、牛皮紙、水桶、磅秤、鐵鍬、掃帚、酒精燈、L形鐵棒、無棉蓋體等。

三、培養基配方（二級菌種和三級菌種培養基配方）

1．木屑麥麩培養基（適于各種木腐類食用菌）  闊葉樹木屑78%，麥麩20%，蔗糖1%，石膏粉1%，pH 7.0，含水量為60%。

2．種木培養基（適于各種木腐類食用菌）種木5份，木屑麥麩培養基1份，蔗糖（按干種木重）1%-2%。

四、實驗步驟

1．以木屑麥麩培養基為例

①按配方中比例稱取木屑、麥麩、石膏粉，在干凈水泥地面上混合拌勻。

②按配方中比例稱取蔗糖，溶于少量的水中做母液，使用時沖稀。

③將蔗糖水先與混勻的干料攪拌均勻，然后再酌情加水，邊拌邊檢查含水量，直至用手握緊培養料時，指縫有水紋滲出，但沒有水滴下為度。

④木屑培養基調濕拌勻后，分裝于750g菌種瓶（袋）中，先裝入2/3，用手握住瓶頸，瓶底放在木屑堆上輕輕礅4～5次，使培養基沉實，然后繼續加裝到瓶頸。

⑤用L形鐵棒把培養基壓實至瓶肩，并把培養基表面壓平。培養基的松緊度要求瓶底、瓶中部稍松，上部稍實，以利通氣發菌。

⑥用直徑為1.5 cm的尖尾木棒在培養基中央鉆一個圓洞，洞深為料層的4/5，整平洞穴四周料面。

⑦洗凈瓶壁，將已裝好培養基的瓶豎放在裝有清水的大盆內，洗凈外壁，然后將菌種瓶倒置略傾斜放入水中，讓水進入至接近培養基料面（不要接觸料面），旋轉玻璃瓶，利用瓶內水旋轉沖力，將瓶肩內壁木屑沖洗干凈。

⑧用干布將瓶口擦干，塞上棉塞，棉塞的表面要光滑，松緊適中，以捉住棉塞頭而整個容器不會跌落，又能拔出棉塞為宜。

⑨包上牛皮紙，放入高壓鍋中滅菌，壓力是0. 11～0. 14MPa，1.5～2h。

2．種木培養基先把制好的種木（楔形或圓柱形）曬干后，放入1%～2%的蔗糖水溶液中浸泡12～16h，讓其吸足水分。取一塊圓柱木用小刀從中央縱切開，無白心為吸足了水分。然后用五份種木，加入1份配好的木屑麥麩培養基，混勻后裝瓶，種木之間用木屑培養基填滿，最后在面上再蓋一層木屑培養基，用L形鐵棒壓面，以防洗滌時種木跌落。塞好棉塞，包上牛皮紙．高壓滅菌(0. 14MPa，2h)。

3．塑料袋裝培養基

(1)稱料、拌料。按比例和要求配制培養基，如配制木屑麥麩培養基同上述木屑麥麩培養基制備過程。

(2)裝料。先裝入少量的培養基，將袋底整成方形，然后邊裝料邊壓，使其松緊適中，整平料面后，用1. 5～2. 0cm直徑的圓形尖頭木棒，在料中央打洞，洞深為料層的4/5，整平洞穴四周料面。

(3)封口。將塑料套環(高3.5cm，口徑3cm)套入塑料袋口，向外翻折，用手把口攥實，塞上棉塞，包上牛皮紙。

(4)滅菌。如采用高壓滅菌0.11～0. 14MPa，2h，應緩慢放氣，否則易引起脹袋。

五、實驗報告

1．簡要敘述二級菌種和三級菌種培養基制作步驟。

2．如何用手測法檢查培養料的含水量？