二苯胺DNA比色法定量測定試劑盒產品說明書
主要用途
二苯胺DNA比色法定量測定試劑是一種旨在通過二苯胺與DNA的特異性結合反應，借助可見光波長的吸光峰值的變化，比色測定樣品中DNA的絕對含量或濃度的技術方法。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環境中DNA含量分析。產品即到即用，性能穩定，簡易方便，無需樣品純化，定量準確。
技術背景
二苯胺（diphenylamine）具有與DNA酸性水解脫嘌呤后釋放的脫氧核糖（deoxyribose）轉變的ω-羥基菊芋糖醛（ω-hydroxylevulinyl aldehyde）特異性反應的功能，形成藍色復合物。但不與RNA的核糖 （ribose）反應。通過可見光（600nm）吸收可以進行定量分析。因此避免了A260測定的種種限制，例如對樣品的純化要求、對DNA的單鏈雙鏈的要求和對紫外光UV的需求，以及RNA的干擾。
產品內容
緩沖液（Reagent A） 8毫升
分解液（Reagent B） 8毫升
反應液（Reagent C） 25毫升
穩定液（Reagent D） 125微升
標準液（Reagent E） 200微升
產品說明書 1份
保存方式
保存穩定液（Reagent D）和標準液（Reagent E）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；其中反應液（Reagent C）和穩定液（Reagent D），具有腐蝕性，注意操作安全，且避免光照，有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
恒溫水槽：用于反應物孵育
比色皿：用于比色分析的容器
分光光度儀：用于樣品比色測定
實驗步驟
測定準備
準備好待測樣品，置于冰槽里
設定好分光光度儀：波長600nm，并置零
準備好9個1.5毫升離心管，標記為1至9號管
按照下表配制標準液
放進冰槽里備用，避免光照
管號
緩沖液（Reagent A）
標準液（Reagent E）
標準DNA濃度
1
0
20微升
20微克/10微升
2
5微升
15微升
15微克/10微升
3
10微升
10微升
10微克/10微升
4
12微升
8微升
8微克/10微升
5
14微升
6微升
6微克/10微升
6
16微升
4微升
4微克/10微升
7
18微升
2微升
2微克/10微升
8
19微升
1微升
1微克/10微升
9
20微升
0
0
二、比色測定
實驗開始前，小心移取6毫升反應液（Reagent C）和30微升穩定液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，混勻后，標記為反應工作液，避免光照。然后進行下列操作。
準備至少10個新的1.5毫升離心管作為測定管：標記9個標準管和1個待測樣品管
分別加入140微升緩沖液（Reagent A）到每一個標準管和樣品管
分別加入10微升上述配制的標準液（Reagent E）到相應測定管里（注意：濃度和管號對號入座）
加入10微升待測樣品到樣品管里
分別加入150微升分解液（Reagent B）到所有測定管里
放進70℃干式恒溫槽或恒溫水槽孵育20分鐘
在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
分別加入600微升含有反應液（Reagent C）和穩定液（Reagent D）的反應工作液到所有測定管里
放進37℃培養箱（暗室環境）孵育5小時
即刻分別移入到1毫升比色皿，放進分光光度儀讀數：獲得吸光讀數
構建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光單位（OD）；橫座標（X軸）為標準DNA濃度（微克/10微升）
根據標準曲線獲得樣品對應DNA濃度（微克/10微升）
樣品實際DNA濃度：
[根據標準曲線獲得樣品對應DNA濃度（微克/10微升）X樣品稀釋倍數]÷100＝微克/毫升
注意事項
本產品為10次樣本操作
操作時，須戴手套
系統操作時，標準樣品測定只需1次
反應液（Reagent C）、穩定液（Reagent D）和反應工作液，避免光照
操作時注意安全，尤其在使用反應液（Reagent C）、穩定液（Reagent D）和反應工作液時，十分小心
待測樣品無需純化，包括去蛋白、去RNA等處理
計算實際濃度時，不要忘記待測樣品的稀釋倍數
使用無水乙醇清洗比色皿
本公司提供系列DNA定量分析試劑產品
質量標準
本產品經鑒定性能穩定
本產品經鑒定定量準確
來源：上海一基實業有限公司
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