（1）貧血患者，外周血象及骨髓涂片提示巨細胞低色素性貧血，血網織紅細胞數減少，黃疸指數增高。
（2）血清維生素B12含量降低，正常值為110～660pmol/L（140～900μg/L）,低于100μg/L考慮診斷維生素B12缺乏癥。但目前認為血清維生素B12水平不能準確反應機體是否真正缺乏維生素B12。血清維生素B12隨其結合蛋白量的改變而改變，如果存在維生素B12的轉運和代謝障礙，影響其依賴酶的活性，使細胞不能充分利用有活性的甲基維生素B12和腺苷維生素B12，仍可導致SCD的發生。故僅憑血清維生素B12水平來衡量維生素B12是否缺乏不可靠。目前我國還不能常規檢測細胞內維生素B12水平，因此不能確定血清維生素B12水平升高或正常者是否存在細胞內維生素B12缺乏。
（3）注射維生素B12，100μg/d，10日后出現顯著的網織紅細胞增多，有助于SCD臨床診斷。
（4）血清維生素B12含量正常者可行Schilling試驗：口服放射性核素57鈷標記維生素B12，測定尿、糞中排泄量，正常人吸收量為62%～82%，尿排出量為7%～10%，可發現患者維生素B12吸收缺陷，糞便放射性核素57鈷標記維生素B12排泄量明顯增多而尿排泄量明顯減少。但由于此試驗使用放射性物質以及操作繁瑣等原因，目前已較少應用。
（5）血清抗內因子抗體有助診斷。
（6）維生素B12缺乏，導致其代謝過程中的兩種物質即HCY和MMA在體內聚集增加。血清中HCY及MMA聚集可反映細胞內維生素B12活性，即功能維生素B12的情況。近年的研究認為全轉運谷氨酸素（holoTC）是維生素B12缺乏的最早的參數，holoTC降低加上MMA濃度的增加預示代謝中的維生素B12缺乏，此時可能仍然無臨床癥狀，建議在亞臨床時就進行治療。但目前這些指標臨床實效性仍有待驗證。