酵母轉錄因子GCN4是通過亮氨酸拉鏈(bZIP)結構結合DNA的蛋白質之一,當GCN4二聚體與DNA結合時,亮氨酸拉鏈區的2個單體結合為平行的卷曲螺旋結構,而其基區由無規線團結構變為α螺旋.為探討亮氨酸拉鏈蛋白與DNA的結合機理,設計了含有GCN4亮氨酸拉鏈蛋白基區結合DNA的必需氨基酸的折疊片段,并將其克隆到Escherichia coli BL21,討論了此亮氨酸拉鏈蛋白的表達條件.在蛋白質的小量表達試驗中,重組子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨芐青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液體培養基中培養至對數期,加入不同濃度的IPTG,繼續培養以誘導蛋白質的表達,在不同的時間( 如:誘導前,誘導2,4,6,8 h) 取樣100 μL到1.5 mL離心管中、離心收集沉淀,將沉淀懸浮于樣品緩沖液中,用10% SDS-PAGE檢測;在10 L含氨芐青霉素和氯霉素的LB液體培養基中進行了大量表達,根據小量表達的試驗結果確定了IPTG的濃度和誘導時間. 結果表明:含有這種拉鏈蛋白質的重組子Escherichia coli BL21在37℃下小量培養時,0.1~0.8 mmol的 IPTG均可在2~10 h內誘導該蛋白質表達; 而大量培養時,0.2 mmol和0.4 mmol的 IPTG在37℃均不可能誘導表達,只在28℃時才表達; 小量培養和大量培養的最佳誘導時間為4~6 h,誘導劑 IPTG的濃度為0.2 mmol,大量表達的溫度為28℃而不是 37℃.