4 親和層析
4.1 原理 親和層析是應用生物高分子與配基可逆結合的原理,將配基通過共價鍵牢固結合于載體上而制得的層析系統.這種可逆結合的作用主要是靠生物高分子對它的配基的空間結構的識別.常用的生物親和關系有酶-底物、底物類似物、抑制劑、激活劑、輔因子,抗體-抗原,激素-受體蛋白、載體蛋白,外源凝集素-多糖、糖蛋白、細胞表面受體,核酸-互補核苷酸序列、組蛋白、核酸結合蛋白等 〔10,11〕 .
4.2 離子交換劑 親和層析的層析劑可分為3個部分:
（1）載體,載體起支架作用,一般是偶聯凝膠或多孔玻璃珠.
（2）間臂,由于生物大分子的空間位阻作用,需加一間臂,其長度具有重要作用.太長則增加了非特異性疏水吸附作用,太短則起不到應有的作用.
（3）配基,這是親和層析的核心物質,在分離中起特異性吸附欲分離物的作用.配基一般分為天然配基（包括糖結合配基和蛋白質結合配基）、染料配基、氨基酸類親和配基、核苷酸及核苷酸類似物配基和仿生配基等幾類.其中利用計算機輔助設計的仿生配基 〔12～15〕 和膜層析 〔16〕 代表了親和層析的發展方向.不僅是配基本身的結構,它們與載體的連接方法也與層析的分離能力有關 〔17〕 .
4.3 影響因素與洗脫 親和層析中配基與欲分離物吸附作用的大小主要與配基的空間結構有關,因此可以用分子間相互作用的平衡常數K D 來衡量親和作用強度 〔18〕 .但它們的結合力仍不外乎對應的功能基團之間的氫鍵、靜電作用、疏水作用等.所以,除了可改變配基以改變親和層析的作用強度以外,還可以通過改變pH和離子強度的方法來改變配基與生物大分子之間的親和力,從而達到洗脫的目的 〔19〕 .但由于親和層析的多樣性,洗脫的條件常常需要通過實驗來獲得.除此以外,還可運用其它配基、抑制劑等物質與出層析劑上的配基或生物大分子產生競爭性結合,達到洗脫的目的,這種方法被稱為專一性洗脫.專一性洗脫可以獲得很高的分辨能力,但洗脫劑的價格較高,所以常與普通洗脫配合使用.值得注意的是,在洗脫時,會有少許配基與蛋白質一同被洗脫下來,因此常在其后加一凝膠層析以除去小分子的配基.
4.4 應用及舉例 在實際使用中,配基與欲分離蛋白質之間的親和力要控制在一定的范圍之內,這是因為若親和力太低,則分離的效果不好;若親和力太高,則洗脫太困難.因此配基與欲分離蛋白質之間的K D 值一般控制在10 -4 10 -6 之間
親和層析的原理與眾所周知的抗原一抗體、激素一受體和酶一底物等特異性反應的機理相類似，每對反應物之間都有一定的親和力。正如在酶與底物的反應中，特異的廢物(S')才能和一定的酶(E)結合，產生復合......
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