人乳鐵蛋白（LT）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人乳鐵蛋白（LF）酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中乳鐵蛋白(LF)的含量。
實驗原理
本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本中人乳鐵蛋白（LF）水平。用純化的人乳鐵蛋白（LF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入乳鐵蛋白（LF），和HRP標記的LT抗原，使它們競爭結合，，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的乳鐵蛋白（LF）的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人乳鐵蛋白（LF）的含量。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 8 | 標準品S1（150μg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 標準品S2（100μg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3（50μg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S4（25μg/ml ） | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5（12.5μg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 終止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 說明書 | 1份 |
7 | 樣品稀釋液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
標本要求
1．標本處理：（1）水樣 采集后經 -20℃反復凍融三次，再經玻璃纖維過濾后，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關文獻提取進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 加樣：分別設標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。