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  • 發布時間:2019-12-04 11:56 原文鏈接: 人山梨醇脫氫酶ELISA檢測試劑盒說明書

    人山梨醇脫氫酶ELISA檢測試劑盒說明書試驗原理:SDH試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知SDH濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將SDH和生物素標記的抗體同時溫育。人山梨醇脫氫酶ELISA檢測試劑盒洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中SDH的濃度呈比例關系。

    自備材料

    1.蒸餾水。

    2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

    3.振蕩器及磁力攪拌器等。

    人山梨醇脫氫酶ELISA檢測試劑盒說明書安全性

    1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

    2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

    3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

    人山梨醇脫氫酶ELISA檢測試劑盒說明書操作步驟

    1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

    2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

    3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

    4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

    5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

    6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

    7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

    9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

    局限

    6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

    試劑盒性能

    1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

    2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

    3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

    結果判斷與分析

    1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

    2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的SDH標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的SDH含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度

    3、檢測值范圍:0-800pmol/L

    4、敏感度: 1.0 pmol/L


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