細胞同步化可以通過人工誘導而獲得,即通過藥物誘導,使細胞同步化在細胞周期的某個特定時相。目前應用較廣泛的誘導同步化方法主要有兩種,即DNA合成阻斷法和分裂中期阻斷法。
DNA合成阻斷法指采用低毒或無毒的DNA合成抑制劑,將細胞抑制在DNA合成期,從而實現同步化。目前采用最多的DNA合成抑制劑為TdR(胸腺嘧啶核苷)或羥基脲。以TdR阻斷法為例:將一定劑量的TdR加入培養液,凡處于S期的細胞立刻被抑制(但可能處于S期中的任何時期),而其他各期的細胞則照常運轉。培養一定時間(G2+M+G1)后,其余所有細胞則被抑制在G1期和S期的交界處。此時細胞總體所處的時間區段仍然較寬(見“TdR阻斷法”圖B);為了進一步同步化,需要洗脫TdR進行培養,并且在細胞進入下一個S期前(見“TdR阻斷法”圖C)再次加入TdR,使所有細胞被抑制在G1/S期交界處,從而實現同步化。
TdR阻斷法
此方法的優點是同步化效率高,幾乎適合于所有體外培養的細胞體系。