實驗方法原理 采用SCID 小鼠皮下接種107 細胞可成功地建立人人彌漫性大B 細胞淋巴瘤（DLBCL ）移植瘤模型，成瘤率70%，腫瘤的組織學表現類似于人DLBCL。
實驗材料 SPF 級SCID 小鼠
試劑、試劑盒 RPMI 1640培養液青霉素谷氨酰胺鏈霉素CD19 APC抗體CD20 PE抗體 CD24 PE抗體山羊抗兔IgG FITC
儀器、耗材 流式細胞儀離心機水浴培養瓶冰箱注射器離心管封口膜微量移液器
實驗步驟
一、細胞培養
1. SUDHL-4為人GCB 樣DLBCL細胞株。將初始密度為2.5× 105 /ml 細胞置于含10% FBS、100 U /ml 青霉素、100 μg /ml 鏈霉素、30 μg /ml 谷氨酰胺的RPMI1640 培養液的T25 細胞培養瓶中，在37℃、5%CO2、飽和濕度孵箱中培養。
2. 待2-3 d 第1 次傳代后，轉入T75 細胞培養瓶，以后根據細胞生長情況適時移入T150 細胞培養瓶。
二、流式細胞術檢測樣品的制備
1. 取對數生長期的SUDHL-4 細胞，用無血清PBS 漂洗2 遍后，于PBS /2% FBS 中制成細胞懸液( 1 ×107 /ml) 。
2. 根據說明書建議的適宜濃度加入相應抗體，4℃避光孵育15 min；若需胞內染色，則先采用1% 多聚甲醛對細胞進行固定，然后用破膜劑( 0.25% Saponin) 處理，同時加抗體進行染色，4℃避光孵育過夜。
3. 細胞用PBS /2% FBS 漂洗1遍，懸于200 μl PBS 待測。
4. 流式細胞儀檢測時每份樣品均測定3 × 105 細胞，用FlowJo 軟件對檢測結果進行分析。
三、實驗動物
1. SPF 級SCID 小鼠，雌性，5 周齡，體重16-20 g隨機分組，飼養及實驗均在恒溫( 20 - 26℃) 、恒濕( 50% -56%) 的SPF 級鼠房內進行。
2. 小鼠置于層流架帶蓋鼠盒中，空氣經中效過濾，喂食標準顆粒飼料，與鼠接觸的一切物品均事先經滅菌處理。
四、細胞接種
1. 取對數生長期的SUDHL-4 細胞，用無血清PBS 漂洗2 遍后，懸浮于無血清PBS。
2. 實驗組小鼠( 每組10 只) 在其一側肋部皮下接種0.1 ml 含107 細胞的細胞懸液； 2 個成瘤對照組分別為每組3 只，在右側肋部皮下接種0.1 ml 分別含5 × 106 細胞和1 × 106細胞的細胞懸液； 正常對照組( 每組10 只) 在右側肋部皮下注射0.1 ml PBS。
3. 接種前小鼠不經任何處理。
五、荷瘤鼠指標檢測
1. 實驗期間每日觀察小鼠一般情況、成瘤及腫瘤生長情況。
2. 每日測量體重和腫瘤長短徑和高度，并計算腫瘤體積( 計算方法： π/6 × 長× 寬× 高) ；當瘤體達到1 200 mm3 時視為人道終點。
3. 小鼠經麻醉并拉頸處死后，先觀察體表各部位成瘤情況；然后解剖動物，觀察各內臟器官和淋巴結轉移情況。
4. 取下腫瘤，置于10%中性福爾馬林溶液固定，常規石蠟切片，HE 染色觀察。
六、統計學處理
實驗數據以均數± 標準差( X ± SD) 表示，采用SPSS11.5 統計軟件包處理，各組樣本均數比較采用單因素方差分析( ANOVA) 。
其他
一、實驗討論
雖然WHO 將DLBCL 列為一類獨立的病種，但其在流行病學、臨床特征、組織形態學、分子遺傳學和免疫表型、對治療的反應及預后等多方面，均表現出明顯的異質性。DLBCL 的免疫表型十分復雜，且與預后的關系非常密切。研究與腫瘤細胞發生、發展相關的蛋白表達，不僅在DLBCL 的診斷分型、預后評估以及臨床治療中均具有重要的指導意義，而且有助于淋巴瘤發病機理的闡明，及特異性靶向治療藥物的研發。盡管此前曾有少量文獻報道針對人類來源的DLBCL 細胞株SUDHL-4 的研究，本實驗對SUDHL-4 細胞體外培養的生物學特性和相關標記物表達進行了研究，并建立了穩定的基于SUDHL-4 細胞的人DLBCL 動物模型。
在不同條件下對SUDHL-4 細胞進行培養后發現，10%為相對適合的血清濃度。此前有文獻報道，人DLBCL 細胞株體外培養建議采用Iscove' sMEM。本實驗證明，采用加入10% FBS 的RPMI1640 培養，細胞生長良好，傳代速度適中，4－ 5 代的細胞活力旺盛，具有較高的接種成功率，且適于進行流式分析等其他實驗。