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  • 發布時間:2020-09-14 21:28 原文鏈接: 人臍靜脈內皮細胞分離培養儀器試劑和操作步驟

    溶液以及器材:

    1、用RPMI-1640配I型膠原酶 0.1g/100ml

    2、配三抗:

    青霉素:100ku/L

    鏈霉素:100ku/L

    慶大霉素:100ku/L

    3、培養液(M199+ECGS[3ug/ml]+15%胎牛血清)有EGF可以適當加點10ng/ml

    4、大瓶生理鹽水

    5、廣口瓶(臍帶數+1)

    6、止血鉗(臍帶數×2+2)

    7、大針頭數個(用于吸取生理鹽水,膠原酶)

    8、手術剪刀數把

    使用前器械高溫蒸氣滅菌。

    實驗步驟:

    1、去婦產科取當天新鮮臍帶(廣口瓶;生理鹽水),試驗前放入4度冰箱。

    2、辨別臍帶靜脈(粗大的那根),順著靜脈瓣插入大針頭,注入生理鹽水,充分沖洗臍靜脈,至流出液體中無可見血液。

    3、夾住臍帶下端,從上端灌注0.1%的膠原酶,鉗住臍靜脈上端,37度孵育15分鐘(已經足夠);如果消化液中出現絮狀物,說明消化時間過長。


    4、收集消化液,并用含小牛血清的RPMI-1640 沖洗臍靜脈,沖洗液并入消化液中。1000-1500轉離心10分鐘。

    5、將細胞懸浮于培養液中(一根臍帶一般可以一個培養瓶,如果細胞少就六孔板一個孔),細胞不能太稀疏,否則生長緩慢。

    6、正常情況下三天長滿傳代,正常的內皮細胞長滿后如同卵石狀。


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