人骨肉瘤蛋白質組雙向凝膠電泳圖像分析方法的建立與應用

[摘　要] 　目的: 建立人骨肉瘤蛋白質組雙向電泳圖像分析方法。方法: 組織標本分為骨肉瘤組和腫瘤旁組。對第一向雙向電泳的關鍵因素與環節進行一系列優化。分離骨肉瘤總蛋白, 銀染, 用ImageMasLer 2D Elite3101 分析軟件分析圖譜, 使用基質輔助電離解析飛行時間質譜儀主要高豐度部分差異蛋白質進行鑒定。結果: 獲得分辨率和重復性好的雙向電泳圖譜。變異系數平均值( %) 和變異系數范圍( %) : 骨肉瘤組為23100 ±10111 和3180～6189 , 腫瘤旁組為20133 ±9190 和2170～6189 。同一蛋白質斑點在3 次實驗中等電點、分子量的相對標準差分別為(8193 ±1117) %、(10116 ±2102) %和(10187 ±3186) %。初步鑒定11 個蛋白, 其中9 個蛋白質只在骨肉瘤中特異高峰度上調表達, 分別為轉甲狀腺素蛋白、磷酸甘油醛異構酶、慢收縮骨骼肌鈣蛋白T、心肌鈣蛋白、肌動蛋白、肌球蛋白、膜聯蛋白25 、熱休克蛋白21 及Fanconi anemia groupD2 蛋白; 鑒定2 個蛋白, 錳超氧化物歧化酶、碳酸酐酶蛋白質下調表達。結論: 成功構建了用于研究骨肉瘤蛋白質組雙向凝膠圖譜分析方法, 認為初步鑒定的部分差異蛋白可能為骨肉瘤的關聯蛋白, 其在骨肉瘤發生和進展的病理過程中具有重要作用。