1、將靜脈血20ｍl用ACD抗凝劑以容積比血：抗凝劑＝9：1抗凝處理
2、按血：分離液＝1：2注入國產淋巴細胞分離液上層，400g 20℃離心30分鐘
3、交接層重浮于4倍體積的RPMI1640并通過離心法200g，10min洗三次
4、獲得細胞可做分選或其他實驗。
體會：
1、實驗中我用過肝素方法抗凝，但效果不好，因為肝素抗凝后交接層混濁，洗滌后沒有細胞。后來是一位老師推薦我用ACD抗凝劑，效果very good
2、實驗用的是國產淋巴細胞液（天津TBD），沒有用過進口的Ficoll/Paqnl
3、分層時的離心溫度只能在20－25℃，過高細胞容易死亡或破壞，過低分層效果不好。我剛開始不知道，試過用5℃離心，其結果是一塌糊涂
4、不能使用角離心機。