細胞骨架的第三種纖維結構稱 中間纖維（intermediate filament,IF），又稱中間絲、中等纖維，直徑介于微管和微絲之間（8nm-10nm)，其化學組成比較復雜。構成它的蛋白質多達5種，常見的有 波形蛋白(vimentin)、 角蛋白(keratin)、 結蛋白、神經元纖維、神經膠質纖維。在不同細胞中，成分變化較大。中間纖維使細胞具有張力和抗剪切力。中間纖維有共同的基本結構，即構建成一個中央α螺旋桿狀區，兩側則 細胞骨架是大小和化學組成不同的端區。端區的多樣性決定了中間纖維外形和性質的差異和特異性。
以上這些 結構單元并非是一成不變的，而是隨細胞的生命活動而呈現高度的動態性，它們均由單體蛋白以較弱的非共價鍵結合在一起，構成纖維型 多聚體，很容易進行組裝和去組裝，這正是實現其功能所必需的特點。