細胞化學染色是細胞學和化學相結合而形成的一門學科,它以細胞形念學為基礎,結合運用化學反應的原理對血細胞內的各種化學物質做定性定位和半定量分析的方法.
一)固定
固定有物理法與化學法,物理法為干燥和火焰固定,化學法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。
(二)顯示
1、偶氮偶聯法:利用人工合成的酶底物,在酶作用下,產生分解產物,再與重氮鹽結合引起偶氮偶聯,使其形成不溶性的偶氮色素,以此證明酶的存在。
2、聯苯胺法:粒細胞和單核細胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫,釋放新生態氧,使無色的聯苯胺形成藍色沉淀。
3、普魯士藍法:細胞內、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用,形成藍色亞鐵氰化鐵沉淀。
細胞化學染色圖冊
4、雪夫反應:過碘酸氧化細胞內糖類中乙二醇基形成乙醛基,醛基與雪夫試劑作用,使無色品紅形成紅色沉淀。
5、金屬沉著法:其他尚有物理學方法,如脂溶性染料染色(顯示脂質)、熒光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用于臨床血液細胞學診斷。
(三)細胞化學定量
粗略估量,以染色反的強弱,受色的深淺,人為地區別為陰性和各種程度的陽性。
百分法,只能反映細胞陽性率,不能反映受色強弱。
積分法,是常用的半定量法,將等級估量與百分率相結合它既反映了細胞陽性率的高低,又反映了細胞受色的強弱。
細胞化學染色 -
過氧化物酶染色
(一)四甲基聯苯胺法生物
原理
粒細胞和單核細胞的胞漿內的髓過氧化物酶(POXorMPO)分解過氧化氫,釋放新生態氧,使無色聯苯胺氧化成藍色聯苯胺,后者進一步變成棕色化合物沉著于細胞質內。
試劑
1%TMB、亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液、1%過氧化氫溶液、稀過氧w化氫溶液、瑞氏染色液
操作
1、取0.1%TMB乙醇溶液lml,加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10ml,溶液呈淡棕黃色。
2、在新鮮干燥的血片上,加混合溶液0.5ml,放置lmin后,再加稀過氧化氫溶液0.7ml,染色6min。
3.瑞氏染液復染15~20min。
4.油鏡鏡檢。
結果
細胞質內有藍黑色顆粒者為陽性。
(-)無顆粒沉著;
(±)顆粒細小,分布稀疏;
(+)顆粒較粗,局灶分布;
(++)顆粒粗大,分布較密,占胞質1/2~2/3;
(+++)顆粒粗大,呈團塊分布;
(++++)全部胞質均部滿顆粒,可覆胞核。
臨床意義
POX主要分布在粒細胞和單核細胞內,隨著粒細胞成熟的程度而逐漸增強,中性分葉核粒細胞為強陽性。嗜酸性粒細胞陽性程度最強,其陽性顆粒比中性粒細胞粗大,有折光。堿性粒細胞為陰性。
(2)單核細胞:
原始單核細胞為陰性反應,幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應,顆粒細小,彌散分布。
(3)其他細胞
淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、組織細胞、巨核細胞均呈陰性反應。
(4)血小板過氧化物酶
主要定位于幼稚型巨核細胞的核膜上,可作為原巨核細胞的一種標志物,有助于FABM7的識別。
(5)過氧化物酶染色
主要用于鑒別急性白血病類型,急性髓細胞白血病多呈陽性反,以M3和M2型反應最強,MI和M5型反較弱,S故有助于區別M3和M5型。S急性淋巴細胞白血病呈POX陰性反,故為急性髓細胞和淋巴細胞白血病鑒別的重要指標。