Tm值就是DNA熔解溫度，指把DNA的雙螺旋結構在熱變性過程中紫外吸收值達到最大值的1/2時的溫度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比關系。
核酸Tm值（解鏈溫度）計算
評價標準是核酸所吸收的光線量達到其所增加吸收260nm光線的量的兩倍達到的溫度，
當核酸達到Tm值時，其260nm吸收量可增加百分之四十（紫外吸收量隨解體程度而增加，直至完全解體。
長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
對于更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
公式中，Size = 引物長度。