1. 先用剪刀大致剪切葉片或莖桿，然后在少量的介質中用刀片切成碎片。
2. 對于 1 g 新鮮組織，在 1 ml 介質中用研缽和杵搗碎使組織勻漿化。
勻漿介質：
50 mmol/L FiEPES
10 mmol/L KCI
1 mmol/L EDTA
10 mmol/L 抗壞血酸
0.1% BSA
5 mmol/L DTT，pH 7.5
0.4 蔗糖
3. 用單層的 Miracloth 擠壓濃縮的勻漿液以除去沒有破碎的細胞、細胞壁和細胞碎片。
4. 將勻漿液轉移至 35 ml 或 50 ml 的離心管中。
5. 用吊桶式轉頭以 1000 g 離心 10 分鐘來除去細胞核、淀粉和完整的葉綠體。
6. 將 1000 g (10分鐘）的離心上清鋪到不連續的蔗糖梯度上，梯度是在 35 ml 的管中用含有 4 ml 的 37% (w/v) 的蔗糖和 8 ml 21.5% 的蔗糖制備的。
7. 以 22000 r/min 離心 30 分鐘（65000 g，Spinco SW28 轉頭）。
8. 將位于勻漿液與 21.5% 蔗糖界面處的膜（為內質網）以及位于 22.5%-37% 蔗糖界面處的膜（為高爾基體）收集于不同的管中，懸于梯度上層的黃色清亮上清中 。
9. 以 20000 r/min ( 50000 g，SW28 轉頭）離心 20 分鐘或以相似的條件（17000 r/min 30分鐘，35000 g，SS-34 Sorval 轉頭）離心使重懸后的物質沉淀出來。
10. 為除去污染的質體和質膜，將沉淀重懸于含有 5 mmol/L 磷酸鉀（pH 6.8 ) 的 0.5 ml 的 0.25 mol/L 蔗糖中，然后加到含有 5.9% PEG 4000 和 5.9% (w/w) 葡聚糖 T-500 ( Phamiada) 的 4-g 兩相系統中。
11. 在冰浴達到平衡之后，每一只兩相管用石蠟封口膜蓋住并用拇指按下；將管子在低溫下作 40 次劇烈翻轉之后重新在冰浴中平衡。
12. 用低速離心（750 r/min，100~200 g，10分鐘）分相。
13. 分別收集上相（含界面）和下相，用不含蔗糖和膜的勻漿介質稀釋。
14. 以 20000 r/min ( 50000 g）離心 20 分鐘收集。 展開 | 
