(2)配制甲醇/水(80:20 體積比)溶液(每周配制一次,或根據需要配制)。
(3)配制1倍 PBS 洗液緩沖液:取100mL 的10倍 PBS,加入到900mL 純水中,即為1倍PBS緩沖液溶液。
(4)配制1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液:取100mL 的10倍濃縮液0.1%吐溫 PBS 緩沖液,加入到 900mL 純水中,即為1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液。
(5)配制 A+B 顯色溶液(每5天配制一次):用微量移液器取20μL 的顯色液B加入到顯色液A瓶中。不用時,一定要將 A+B 顯色溶液密封好,超過5天不能用。
(6)試劑空白試驗(1mL甲醇+1mL A+B顯色劑置于測試管中),熒光計讀數應為0。
(7)緩沖液空白試驗(2mL 1倍 PBS 緩沖液置于測試管中),熒光計讀數應為0。
樣品提取
(1)稱取 50g 磨細的樣品,5g 氯化鈉,置于攪拌杯中。
(2)加入100mL 甲醇/水(80+20)溶液。
(3)蓋上攪拌杯的蓋子,高速攪拌1min。
(4)取下蓋子,將提取物倒入折疊式濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。
提取物的稀釋
(1)移取10.0mL 上步的濾液,置于干凈的容器中。
(2)用40mL 1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液將濾液稀釋,混勻。
(3)將上步稀釋液通過玻璃微纖維濾紙(10m),濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL。
分離柱色譜操作
(1)將上步10mL 濾液(4mL 相當于0.2g的樣品),以1~2滴/秒的流速全部通過FumoniTest 親和柱,直至空氣進入到親和柱中。
(2)將10mL 1倍 PBS/0.1%吐溫-20洗液緩沖液以1~2滴/秒的流速通過親和柱。
(3)將10mL1倍 PBS 緩沖液,以1~2滴/秒的流速通過親和柱,直至空氣進入到親和柱中。
(4)用1.0mL HPLC 級的甲醇以1滴/秒的流速淋洗親和柱,將所有樣品淋洗液(1mL)收集于玻璃測試管中。
(5)將1.0mLA+B顯色劑加到測試管的淋洗液中。混勻后,將測試管置于已標定好了的熒光計中。240s 后,讀數。
檢測限
0.25mg/kg,測定范圍:0~10mg/kg。