體內耐藥細胞株的建立實驗是通過細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身生物化學過程的改變,細胞膜上出現Pgp(或P-170)糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受。
| 實驗方法原理 | 細胞與低劑量的藥物長期接觸,引起細胞本身藥物化學過程的改變,細胞膜上出現Pgp糖蛋白,使細胞逐漸對藥物耐受,隨著藥物濃度的遞增,其耐受程度逐漸加強。 |
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| 實驗材料 | 小鼠瘤株 |
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| 試劑、試劑盒 | 肝素生理鹽水 |
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| 儀器、耗材 | 離心機 |
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| 實驗步驟 | 一、材料準備
1. 動物選擇:根據欲建立的耐藥細胞株,選擇合適的動物。在實驗期間,一般選擇同性別動物進行實驗,動物體重的選擇以雌性約17~21 g,雄性約18~22 g 為宜。
2. 瘤株的選擇:常見的瘤株均可,應依據研究目的、方向確定實驗用瘤株,考慮到傳代方便,且容易觀察或檢測,多選擇腹水性腫瘤。
二、實驗步驟
1. 所試藥物的毒性測定
(1)把小鼠隨機分成5~8組,每組10~20只小鼠,每只動物每天給予定量的藥物,每天1次,連續給藥5天,然后觀察30天。
(2)記錄30天內動物的死亡數。藥物的劑量應能使動物的死亡率從0~100%。
(3)計算LD10及95%的可信限,耐藥株建立的最初劑量約為1/6LD10。
2. 瘤細胞生長測定
(1)用傳代第7天的腹水癌細胞給每只動物接種15×106個細胞,7天后處死動物,開腹,收集全部腹水,腹腔用含150 IU的肝素生理鹽水沖洗3次。
(2)合并腹水及沖洗液進行瘤細胞計數,腹水5 500 g 離心5 min,測定瘤細胞壓縮體積。
(3)統計不同劑量用藥組及對照組的瘤細胞壓縮體積,可以測出藥物對腫瘤細胞生長的影響。
(4)藥物劑量一般在LD10時,能完全抑制敏感株腫瘤細胞的生長。
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