實驗方法原理 抗藥性細胞模型的篩選大多采取長時間藥物處理、誘導抗性,最總篩選出具有一定抗性的細胞克隆。
實驗材料 小鼠
試劑、試劑盒 小牛血清DMEMDOX
儀器、耗材 CO2培養箱無菌鋼圈
實驗步驟
一、培養條件
用含10%小牛血清的DMEM培養液,5%CO2,37℃培養。
二、實驗步驟
1. 將CHO細胞培養在含10%血清的DMEM培養液中,先用DOX(阿霉素)0.01 ug/ml 誘導培養CHO細胞3個月。
2. 然后在3個月內逐步增倍DOX的濃度達0.1 ul/ml,接著進行DOX低濃度的篩選。
3. 隨后用無菌鋼圈套取抗性倍數較高的克隆RC1作CHO和RC1對DOX的劑量-反應曲線,求CHO和RC1的IC50值。
4. 抗性倍數即為RC1的IC50與CHO的IC50。
注意事項
1. 要具備培養細胞的實驗室條件,謹防污染。
2. 通過實驗計算出敏感細胞對該藥物的IC50值,以確定其實誘導濃度。
3. 采用長期增量的培養法可產生穩定的抗藥性細胞株,對阿霉素等產生抗性的細胞株,往往對其他天然來源的抗腫瘤藥亦可產生抗藥性。