致命的毒性癥狀有厭食，進行性體重減輕，血性腹瀉、白細胞減少、抑郁和昏迷，甲酰四氫葉酸（葉酸）是有效的解毒劑，可中和甲氨蝶呤引起的造血系統毒性，甲酰四氫葉酸可與甲氨蝶呤競爭進入細胞，通常如懷疑過量，甲氨蝶呤的劑量應等于或大于甲氨蝶呤的相對劑量，并應盡快給藥，甲酰四氫葉酸可以在12小時內靜脈輸注，劑量最高可至75mg，然后每6小時一次肌注12mg，共給藥四次，當甲氨蝶呤的平均劑量似已產生副作用，可給甲酰四氫葉酸6～12mg，每6小時肌注一次，給藥四次。
