使用液相色譜柱時出現的問題

分析液相色譜柱柱壓升高的原因

　   造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內產生了異常的占位性物體，造成流體阻力加大所引起的。

　　1、流動相過濾不良

　　因機械性雜質堵塞進口濾片，導致壓力升高。這往往是由于流動相沒有過濾，或雖已過濾但濾膜孔徑過大或濾片損壞，使固體雜質滯留于濾板上所造成的。 濕度傳感器探頭 , , 不銹鋼電熱管 PT100 傳感器 , , 鑄鋁加熱器 , 加熱圈   流體電磁閥 

　　2、霉菌生長

　　霉菌在流動相中、管路中或柱子進口處繁殖、生長堵塞濾板，導致壓力升高。這種現象在夏季，尤其是使用磷酸鹽緩沖液為流動相時更易發生。在夏季使用磷酸鹽緩沖液時一般要現配現用。即使保存在冰箱中，一般也不要超過兩天。否則，即使不堵塞濾板，也會因細菌或霉菌孳生產生代謝物而造成對樣品分析的干擾。

　　3、非特異性吸附

　　當溶質在柱子上有較強的非特異性吸附，且當前所用的流動相難以將它們洗脫時，累積的未洗脫溶質也會造成阻力增大和壓力升高。

　　4、更換流動相時置換不徹底

　　當改換流動相體系時，不徹底的更換使不同性質、互不混溶的流動相存在于一個體系之中，也會造成壓力升高。

　　5、鹽晶體的析出

　　使用緩沖液或添加有緩沖液的流動相后，緩沖液中的無機鹽成份可能會殘留在體系之中。它們會因在新流動相體系中的溶解度降低而析出，造成流體阻力加大、壓力升高。

　　6、樣品的沉淀

　　當樣品所使用的溶劑與流動相不一致時，樣品進入柱中有時可能因溶解度降低而沉淀出來，造成壓力升高。

　　7、壓力脈沖

　　運行過程中，有時會產生系統內壓力的突然升降。例如，轉動進樣閥時動作過緩，造成液流堵塞后再瞬間釋放;開機瞬間壓差較高等。如此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的崩壞和柱床結構的微小變化。填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大。

液相色譜柱的使用和維護

1、色譜柱的使用說明：

　　（1）色譜柱使用前注意事項：色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。

　　（2）流動相：流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水zui好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。

　　以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。

　　（3）樣品：樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進行預處理;若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

　　2、色譜柱的保存

　　（1）反相色譜柱每天實驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

　　（2）長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度zui好是室溫。

　　3、色譜柱的再生

　　因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說可能是柱效下降。

　　（1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

　　（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。

　　4、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法

　　色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：

　　（1）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染;

　　解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。

　　（2）色譜柱頭的填料被樣品污染;

 　解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。

　　（3）色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出;解決方法：如確定定是鹽結晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。

　　（4）流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。解決方法：如果因PH值使用不當，很難恢復。